矛尾复虾虎鱼病原哈氏弧菌的鉴定及特异性检测方法的研究-毕业设计(论文).docVIP

矛尾复虾虎鱼病原哈氏弧菌的鉴定及特异性检测方法的研究 摘 要：2009年8至9月间，江苏赣榆县多家虾蟹养殖塘混养的矛尾复虾虎鱼大量死亡，主要病变特征为体表出血、肌肉溃疡，从矛尾复虾虎鱼深层溃烂组织及肝脏中分离出优势菌，通过感染实验表明了该菌对矛尾复虾虎鱼有很强的致病性，当分离菌浓度在106至108可引起矛尾复虾虎鱼全部死亡。对分离菌进行相关的形态及理化特性等生物学特性检验，分析了16S rRNA和gyrB两种基因序列的同源性，并采用PAUP4.0的最大简约法(maximum parsimony，MP)构建了基于两种基因的MP系统发生树，结果表明引起矛尾复虾虎鱼大量死亡的病原为弧菌属(Vibrio)的哈氏弧菌(Vibrio harveyi)。同时基于gyrB 基因和toxR基因序列各设计了1对特异性引物，接着利用该两对引物进行PCR扩增和敏感性检测，最后进行海产品的检验，建立了一种哈氏弧菌快速、敏感的PCR检测方法。在PCR扩增中，gyrB基因引物A2B3扩增目的片段大小为为363bp，该方法最低能检测0.0046875ng/μL哈氏弧菌模板DNA；toxR基因引物vh-tox-F、vh-tox-R扩增目的片段大小为为390bp，该方法最低能检测0.75ng/μL哈氏弧菌模板DNA。基于哈氏弧菌的gyrB基因和toxR基因建立的PCR检测技术在对由哈氏弧菌所引起的流行病的调查具