苗木抗旱性生理实验方法.docxVIP

2试验方法 2.1试验设计 试验采用盆栽试验的方法，将苗木移栽入合适的花盆中，给予较好的管护。待苗木成活生长 稳定后开始试验。每个品种都设置对照株（给V充足水分）。试验组以时间为梯度 （0d,6d,12d,18d,24d,30d,36d）,采用自然干旱的办法,每隔6天对各项指标进行监测,同时监测 土壤中水分的变化。 2.2指标及监测方法 2. 2.1叶片水分状况 （1） 组织含水量的测定 仪器和用具：电子天平（感量O.lmg）,烘箱，剪刀，100ml烧杯，铝盒，吸水纸 试剂： 剪取组织，迅速放入已知重量的铝盒中，称出鲜重（Wf）；然后将组织浸入蒸憎水中6-8h, 収出用吸水纸擦干表面水分，称重，再将组织浸入蒸僧水中lh,擦干称重，直至组织重量稳定恒 重，既得样品饱和鲜重（Wt）；然后将组织连同铝盒放入己升温至105°C的烘箱中，杀青15min, 然后于80°C下烘至恒重，称出干重（Wd）； 组织含水量（占鲜重）=（Wf-Wd）?100%/Wf 组织含水量（占干重）二（Wf-Wd）?100%/Wd 相对含水量（RWC） = （Wf- Wd）? 100%/ （Wt- Wd） 水分饱和亏（WSD） =1-RWC （2） 离体叶片保水力测定 剪取各个品种各个处理叶片迅速将其插入蒸懈水中，饱和3小时以上，取出叶片，剪去叶柄， 称量叶片重量。然后将叶片悬于室内，在空气中缓慢脱水（记录室温和RH）,每隔两个小吋称重 一次，称4次后，知道24小时再称重1次，将叶片在80°C下烘干称干重。根据所得数据计算出 每次称重时的叶片含水量，再以脱水时间对叶片相对含水率作图，可得叶片保水力的差异。 2. 2. 2光合指标 （1）叶绿素a、叶绿素b、叶绿素和类胡萝卜素含量的测定 仪器和用具：分光光度计，研钵一套，剪刀，玻棒，25ml棕色容量瓶3个，小漏斗3个，直 径7cm定量滤纸，吸水纸，擦镜纸，滴管，电子天平（O.Olg感量） 试剂：96%乙醇，石英砂，碳酸钙粉 a取不同油茶吊种苗木的新鲜叶片，擦净表面剪碎（去掉屮脉），混匀。 b称取剪碎的新鲜样品0.2g （共三份），放入研钵加入少量石英砂和碳酸钙粉及2-3ml96%乙 醇研成匀浆，再加入乙醇10ml,继续研磨至组织变白，静置3-5mino c取滤纸一张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提収液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容 量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 d用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容暈瓶屮，直至滤纸和残渣屮无绿色为 止，最后用乙醇定容至25ml,摇匀。 e把叶绿体色素提取液倒入比色杯，以96%乙醇为空白，在波长665、649、470nm下测定消 光度。 Ca二 13.95。665?6.88。649 Cb=24.96D649?7?32D665 Cx .c=（1000D47（）-2.05Ca-ll 4.8Cb） /245 叶绿素含量（mg/cn?）二叶绿素浓度X提取液总体积X稀释倍数/样品鲜重 叶绿素a含量（mg/cm2）二叶绿素浓度X提収液总体积X稀释倍数/样品鲜重 叶绿素b含量（mg/cn?）二叶绿素浓度X提取液总体积X稀释倍数/样品鲜重 类胡萝卜素含量（mg/cm2）二叶绿素浓度X提取液总体积X稀释倍数/样品鲜重 （2）光合速率、蒸腾速率、气孔导度和水分利用效率的测定 用Lico-6400便携式光合测定分析仪（美国）进行光合测定，在不同处理的树冠中部向阳选収正 常生长的功能叶，测定叶片的净光合速率（Pn）、蒸腾速率（Tr）、气孔导度（Gs）、胞间CO?浓 度（Ci）,并计算水分利用效率（WUE） =Pn/Tro每个样品至少3次重复，结果取平均值。 2. 2. 3生理生化指标 （1） 丙二醛的测定 采用硫代巴比妥酸（TBA）比色法测定。样品提取方法与酶夜提取相同。测定时向具塞试管 中加入2mL样品提取液和3mL 0.5%硫代巴比妥酸（TBA）溶液（用5%乙酸溶液溶解定容），沸 水浴屮煮沸lOmin后取出流水冷却，3000Xg离心15min取上清液，以0.5%TBA为空白调零，分 别在波长532nm, 600nm和450nm下测OD值。结果按下式计算： 丙二醛含量（nmol ?才FW） =[6.452X （D532-D6（x））-0.559XD450] X VXVtX/（WXVs） 式中，V：反应液总量，mL； Vt：提収液总体积，mL； Vs：测定用提取液体积，mL； W：样品 鲜重，go （2） 游离脯氨酸含量测定 采用碱基水杨酸提取，苗三酮显色法测定。 a制作标准曲线：取7支25mL具塞试管，编号，按下表2-2加入试剂： 表2-2游离脯氨酸标准曲线溶液组成 Tab.2-2 Solution compositin of standard