小鼠肺泡灌洗液收集.docVIP

小鼠肺泡灌洗液收集实验材料 1. 1.5mL 离心管 2. 5mL 流式管 3. 18-G滞留针 4. 眼科器械 5. EDTA-生理盐水/PBS/HBSS 6. 3-4%福尔马林（甲醛）溶液 实验步骤 1. 小鼠眼球取血 2. 处死小鼠，剪开胸廓，暴露气管 3. 气管上切开小口，将滞留针插入气管，滞留针头伸入一半长度（切忌过度伸 入，以防刺穿肺脏） 4. 注射器中吸入 0.5mL EDTA- 生理盐水，接上滞留针头，注射入肺内 5. 轻按摩胸腔 10s，吸出 EDTA-生理盐水，加入 1.5mL 离心管 6. 重复一次，加入同一个 1.5 mL 离心管 7. 1.5mL 离心管离心： 300g 5min。收集沉淀细胞用于流式检测，上清用于细 胞因子和 Ig 检测 8. 重复抽吸 8 次，加入 5mL 流式管同样离心细胞与之前混合后细胞计数备用 9. 1/2肺脏加入 3-4%福尔马林溶液，作为切片染色样本 10. ? 肺脏用于组织裂解，流式染色 11.