气相色谱_质谱对三种硅藻脂肪酸组成的测试规律性分析.docVIP

气相色谱2质谱对三种硅藻脂肪酸组成的测试规律性分析 夏静芬,钱国英Ξ,贾永红 (浙江万里学院生物与环境学院,宁波315100 摘　要:借助气相色谱2质谱(G C2MS联用技术比较分析了角毛藻(Chaetoceros muelleri、新月菱形藻(Nitzshia closterium和三角褐指藻(Phaeodactylum tricornu2 tum等3种硅藻在保留时间和质谱裂解方面的异同性规律。结果表明,强极性 柱中各脂肪酸的分离顺序为低碳原子数到高碳原子数,碳原子数相同的组分分 离顺序按低不饱和度到高不饱和度,弱极性柱中色谱出峰顺序也为低碳原子数 到高碳原子数,与强极性柱一致,但碳原子数相同的组分分离顺序则从低饱和 度到高饱和度,与强极性柱恰好相反;不同脂肪酸的质谱裂解表明,饱和脂肪 酸甲酯的基峰为mΠz74,单烯脂肪酸甲酯的基峰为mΠz55,双烯脂肪酸甲酯的 基峰为mΠz67,而三烯以上脂肪酸甲酯的基峰则为mΠz79,本文认为基峰这一 特点可用来确定不饱和度,以助于快速准确的对脂肪酸甲酯进行定性分析;本 文还比较了T MSH和NaOH2CH 3 OH两种甲酯化方法的区别。在此基础上用面积归一化法测定了硅藻脂肪酸的含量,发现3种硅藻都含有饱和脂肪酸、单不饱 和脂肪酸和多不饱和脂肪酸,其中ω23PUFAs主要为EPA。 关键词:硅藻;G C2MS;脂肪酸 　　多烯脂肪酸(PUFAs,特别是以二十碳五烯酸(EPA和二十二碳六烯酸(DH A为代表的ω23PU2 FAs系列,与营养保健和疾病预防等诸多生物功效有重要关系[1~5]。当前,ω23PUFAs主要来源于水生动物提取的油制品,但这些来源却面临诸多问题,于是迫切需要开发一种价格低廉、来源丰富、易于分离纯化的ω23PUFAs来源,海洋硅藻便是首选的重要的来源之一。近年来,对海洋硅藻中PU2 FAs的分析工作日益增多,建立快速、准确、可靠的分析方法,对硅藻中功能性脂肪酸的研究和开发具有极为重要的意义。目前脂肪酸的分析方法主要以气相色谱法为主[6~11],该法只能依据峰的保留时间对各种脂肪酸进行定性分析,且需要昂贵的脂肪酸甲酯标准样品,应用受到限制。G C2MS 法是利用气相色谱对混和物的高效分离能力和质谱对纯物质的准确鉴定能力而开发的分析技术,已较多的应用于测定动物与植物中的脂肪酸含量[12~16],用此法对微藻中脂肪酸含量测定的报导还不多见,特别是对脂肪酸的色谱保留时间规律与质谱特征研究的更少[17]。本文通过G C2MS法测定角毛藻(Chaetoceros muelleri、新月菱形藻(nitzshia closterium和三角褐指藻(phaeodactylum tricornutum的脂肪酸组成和含量,提出了硅藻脂肪酸甲酯保留时间规律和质谱特征,旨在建立准确可靠硅藻脂肪酸测定方法,为硅藻脂肪酸的开发利用打下技术基础。 1　实验部分 1.1　仪器与试剂 Finnigan T race DS Q气质联用仪,CP2Sil8C B MS 毛细管柱30mm×0.25mm×0.25μm。色谱标准样品购自Sigma公司;其他均为市售分析纯试剂。 1.2　实验方法 1.2.1　硅藻的培养和收集　角毛藻(Chaetoceros muelleri、新月菱形藻(nitzshia closterium和三角褐 Ξ基金项目:国家外专局(CG2006330204项目资助作者简介:夏静芬(1976-,女,讲师,硕士 指藻(phaeodactylum tricornutum 由本实验室提供。 培养基采用F Π2配方配制[18] ,培养温度为25℃,光照时间为10h Πd ,光照强度为5000lux ,以0.5m 3Πmin 通气培养,10~15天后收集。于8000~10000r Πmin 离心收集,冷冻抽干,备用。1.2.2　脂肪酸的提取及甲酯化　称取1.0g 硅藻 干粉,碾碎后用苯石油醚溶液浸提,再用NaOH 2CH 3OH 溶液甲酯化,用正己烷萃取,上清液上机分析。1.2.3　气相色谱2质谱检测　气相条件:PT V 进样口,温度270℃。色谱柱初始柱温140℃,保持1min ,然后以4.0℃Πmin 的速度升温到215℃,保 持5min ,再以2.8℃Πmin 的速度升温到240℃,保持5min 。以高纯He 为载气 ,流速1.0m L Πmin ,分流比50∶1,进样量为1μL 。 质谱条件:质谱离子源EI ,温度250℃,能量70V ,灯丝电流100μA ,转移线温度250℃,全程扫描,质量范围 40~300amu ,数据起始采集时间4.20min 。2　结果与讨论2.1　3种硅藻脂肪酸甲酯的气相色谱2质谱图及脂 肪酸相对含量图1、图2和图3分别为在选定的条件下所测得的3种硅藻各脂肪酸组