14分子发光光谱法资料.pptxVIP

第十四章 分子发光分析法;14.1 概述;根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光源来激发而发光 电致发光：以电能来激发而发光 生物发光：以生物体释放的能量激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光—化学发光分析法 ;二、分子荧光分析法的特点;2. 选择性好 不同的物质用不同的光进行激发，选择不同的激发光波长 不同的物质发射的荧光不同，选择不同的检测荧光波长 比较容易排除其它物质的干扰，选择性好 3. 实验方法简单 4. 待??样品用量少；仪器价格适中；测定范围较广 发光强度可定量测定许多痕量的无机物和有机物，广泛应用在生物化学、分子生物学、免疫学及农牧产品分析、卫生检疫等领域。 荧光法比磷光法应用广泛;14.2 荧光和磷光光谱法; 光致发光及影响荧光发射因素;2.激发态→基态的能量传递途径;;非辐射能量传递过程;辐射能量传递过程;二、激发光谱与荧光(磷光)光谱;2. 荧光发射光谱(或磷光光谱);3.激发光谱与发射光谱的关系;三、荧光的产生与分子结构的关系;荧光量子效率 荧光量子效率用φf 来描述 荧光量子效率 ;2. 荧光（磷光）与有机化合物结构的关系 物质只有吸收了紫外可见光，产生? ? ?*、n ? ?*跃迁，产生荧光 ? ? ?*与n ? ?*跃迁相比，摩尔吸收系数大102~103，寿命短 ? ? ?*跃迁常产生较强的荧光 n ? ?*跃迁产生的荧光弱，但可产生系间跨跃，产生更强的磷光;（1） 共轭体系——有较强的荧光 具有共轭体系的芳环或杂环化合物， ?电子共轭程度越大，越易产生荧光; 环越多，共轭程度越大，产生荧光波长越长，发射的荧光强度越强;不产生荧光; 芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系，多数能发生荧光 多环芳烃是重要的环境污染物，可用荧光法测定 3，4-苯并芘是强致癌物 ;（2） 刚性平面结构—较稳定的平面结构;1,2-二苯乙烯;（3）金属螯合物的荧光;（4）取代基的类型;（b）减弱荧光的取代基 ——-COOH 、 -NO2 、-COOR 、-NO、-SH 吸电子基团, 使荧光波长蓝移，荧光强度减弱 芳环上被F、Cl、Br、I 取代后，使系间跨跃加强，磷光增强，荧光减弱。其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，磷光相应增强，这种效应为重原子效应。 （c）影响不明显的取代基 —— -NH3+、-R、 - SO3H等 ;四 环境对荧光、磷光的影响;3. pH的影响;但两个苯环相连的化合物，又表现出相反的性质，分子形式无荧光，离子化后显荧光;4. 内滤光作用和自吸现象;5. 溶液荧光的猝灭; 呈线形关系 只有在浓度低时使用，荧光物质测定的是微量或痕量组分，灵敏度高 浓度高时， If与C不呈线形关系，有时C增大， If反而降低，有时发生荧光猝灭效应。;（一）荧光分析仪器——主要由光源、2个单色器、液槽、检测器和显示器组成;1、光源;2、单色器;3、样品池;;应用示例;蛋白片段互补技术;AF555 (green, excited at 514 nm), AF660 (red, excited at 633 nm);14.4 化学发光分析法;化学发光分析具有以下特点;二 基本原理 ;化学发光反应的类型;氧化剂;鲁米诺H2O2的化学反应，可以被一些痕量的过渡金属元素所催化，使发出的光大大增强，由此可测定Co（Ⅱ）,Cu（Ⅱ）, Ni（Ⅱ）, Cr（Ⅲ），Fe（Ⅱ Ⅲ ），Ag（Ⅰ），Au（Ⅲ ），Mn (Ⅱ) ，Hg（Ⅱ ）Os（Ⅲ ⅣⅤ），Ru（Ⅵ），V（Ⅳ），Ir（Ⅳ）等金属离子，检测限由0.01~40 ?g·mL-1不等 利用鲁米诺发光体系可以测定50余种元素和大量有机和无机化合物，灵敏度都比较高 鲁米诺化学发光体系还可用于许多生化反应研究，常常涉及到H2O2的产生或H2O2参加反应;（2）气相化学发光;化学与生物发光分析的应用;三、装置与技术