基因重组与基因项目工程概述.pptVIP

3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 第一次循环：变性（95oC） 退火 延伸（72oC） 第二次循环 3’ 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 第三次循环 25~30次循环后模板DNA含量可以扩大100万百倍以上 PCR原理 模板DNA 引物 引物 用聚合酶链反应（PCR）方法获取目的基因 一对引物分别含有BamH I 和Hind III 位点，PCR产物经双酶切后，可定向插入载体。 （四）外源基因与载体的连接 作用酶：DNA连接酶 连接方式： 粘性末端连接 平末端 同聚物加尾连接 人工接头 人工接头连接法 BamHI接头 连接酶 BamHI切割 连接酶 + BamHI切割的pBR322 （五）重组DNA导入受体菌 1、重组子导入受体菌的方式? ： 转化（transformation）：特指将质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。 转染（transfection）：病毒及其重组子导入受体细胞。 2、导入方法 氯化钙法 感受态? ：细菌处于容易吸收外源DNA的状态称感受态 制备条件：冰浴、低渗CaCl2 （ 0.1mol/L ） 转化反应：冰浴30分?短暂热休克（42℃） 转化效率：105-106/μg DNA;环状DNA高于线状DNA 1000倍 电穿孔法：电穿孔仪 （