组织培养技术应用.ppt

骨髓间充质干细胞的培养 为骨髓基质细胞的前体细胞 可生成血细胞，能自我更新 能分化成为各种细胞，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及平滑肌细胞。 造血干细胞培养Culturing Hematopoietic Stem Cell 造血干细胞转归 免疫系统的细胞多由造血干细胞衍生。 造血干细胞因细胞间的交互作用及细胞激素控制之下，將不同谱系的细胞发育出來。 中国首次利用IPS细胞克隆出活体鼠 The end! This is the end of this elective * Although many researchers still use D-MEM/F12 with N2 Supplement originally developed for fetal neuron cell maintenance, many others have found that Neurobasal? with B-27 Supplement is superior for the growth of neural stem cells (Wachs, 2003). This is not surprising as B-27 provides a more sophisticated formulation to support the cells . We have confirmed this improved performance observation and have also developed B-27 Supplement minus Vitamin A, a new formulation designed specifically for growing neural stem cells (see below).视黄酸Retinoic Acid (vitamin A) is frequently used to induce differentiation of neural stem cells. By removing vitamin A from B-27, the growth performance of both monolayer and spherical NSC are improved. 4.人胚软骨细胞培养 2mg/ml胰蛋白酶 ＋ 2mg/ml胶原酶 1h 0.5mg/ml胶原酶 37℃过夜 5.淋巴细胞分离培养 促淋巴细胞分裂 淋巴细胞分离 6.人支气管上皮细胞  原代培养 支气管上皮细胞具有再生能力，可体外培养。 用途：用于气管上皮细胞的增殖与分化、细胞功能及癌变机制等研究。 肺癌是支气管源性癌、支气管上皮细胞做正常对照。 组织块贴于涂胶原的培养皿中培养，待融合后传代。 八、干细胞培养 干细胞 stem cell ： 来源于胚胎、胎儿或成体中未分化的具有继续分化潜能的细胞 干细胞分类（一） Totipotent stem cell: 全能干细胞, 如受精卵 pluripotent stem cell: 多能干细胞，如囊胚中的内囊细胞 multipotent stem cell: 专能干细胞，如造血干细胞 干细胞分类（二）： 胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES) 指来自胚胎期桑椹胚的卵裂球或胚泡的内细胞团，具有自我更新能力和多能性。 成体干细胞（adult stem cell,AS） 组织干细胞：神经、骨髓基质、表皮组织 胚胎细胞获得 干细胞培养过程 成年小白鼠未发育的脑干细胞转变为肌肉细胞Angelo Vescovi 和 Giulio Cossu, 2000 9 20他们也用成年人志愿者的神经干细胞实现了同样的工作 体外培养ES细胞可分两种： 有饲养层、无饲养层培养 1.有饲养层培养 常用饲养层细胞 小鼠胚胎成纤维细胞,MEF SIM小鼠的细胞系,STO 饲养层细胞作用：可分泌干细胞生长因子等 以提供ES需要 加入饲养层细胞的影响： 培养体系更复杂； 用于体内治疗时，增加了干扰性因素 2.无饲养层细胞的培养条件 须在培养液中加入不同配伍的各类生长因子，组成最佳选择的培养ES的条件培养液，以保证胚胎在接近正常生理条件下的正常发育。 饲养层细胞与条件培养液配置 饲养层细胞 选用的细胞以丝裂霉素C或伽玛射线照射阻断有丝分裂后制成的细胞单层。 细胞：原代胚胎成纤维细胞、GTO、同源胎儿成纤维细胞、子宫上皮细胞、大鼠肝细胞等。 作用： 促进细胞的增殖和抑制其分化两种作用。 条件培养液 用适当的细胞培养一定时间后