浅谈HPLC法检测咸鸭蛋中非法添加苏丹红染料.docVIP

浅谈HPLC法检测咸鸭蛋中非法添加苏丹红染料 杨沫银 内蒙古食品药品检验所（010020） 摘要：目的：完善检测方法，更好的监控非法添加物。方法：采用高效液相色谱法，改变提取溶剂。结果：苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别在0μg/ml～2.56μg/ml范围呈良好线性关系，回收率在66%～80%之间，方法最低检出限在3.3μg/Kg～7.5μg/Kg（按蛋总重计算）之间。结论：方法简便，结果准确。 关键词：咸鸭蛋 高效液相色谱法 苏丹红 Abstract Objective: To perfect the method of measure method, Better monitoring of illegal additives. Method: Adopt HPLC to change the solvent extraction. Results: the calibration curve showed a good linearity with the range of 0μg/ml -2.56μg/ml for sudan , the range of recovery was 66%-80%, the limit of detection was 3.3μg/kg-7.5μg/kg (According to calculation of the total egg). Conclusion: the methed is simple and the result is accurate. 苏丹红属于化工染料，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号四种。据文献报道[1]，该物质具有偶氮结构，对人体的肝、肾器官有明显的毒副作用。经毒理学研究表明，苏丹红具有致突变性和致癌性，国家明令禁止添加于食品中。本方法参照相关文献[2]，将其提取方法进行了修订，改进后的方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点。 1.样品来源：市售。 2.仪器与试药： 2.1 仪器 美国安捷仑-1100高效液相色谱仪，紫外-可见检测器，离心机，旋转蒸发仪等。 2.2 试剂 乙睛、丙酮、甲酸、为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。 2.3 对照品 苏丹红由D-86199 Augsburg,Gemany提供 苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ纯度≥85%。 2.4 层析用氧化铝（中性 100目～200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷却至室温，每100g中加入2ml水降活，混匀密封，放置12h后使用。 2.5 氧化铝层析柱：在层析柱管（1cm×5cm的注射器管）底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10ml正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用。 3.色谱条件： 3.1 色谱柱：Agilent ZORBAX SB- C18 3.5μm 4.6mm×1 3.2 流动相： A：0.1%甲酸的水溶液∶乙睛 （85∶15） B：0.1%甲酸的乙睛溶液∶丙酮（ 80∶20） 流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长478nm；进样量：10μl。梯度条件见表1 表1 梯度条件 时间（min） 流动相 A% B% 0 25 75 10.0 25 75 25.0 0 100 32.0 0 100 35.0 25 75 40.0 25 75 4.方法学考察 4.1 溶液制备 4.1.1 对照品溶液的制备 分别精密称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），置250ml量瓶中，加乙醚溶适量使溶解，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为标准储备液。精密吸取标准储备液0.0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ml，置25ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，即得。此标准系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56μg/ml。 4.1.2 供试品溶液的制备 称取粉碎样品2g～4g（准确至0.01g），置50ml离心管中，加入水3m，l匀浆1min将其分散成糊状，加入正己烷∶丙酮（3∶1）6ml，充分匀浆5min，3000rpm离心10min，吸出正己烷液，于下层再加入次正己烷（4ml、4ml），匀浆，离心，合并3次正己烷液，加入无水硫酸钠1g脱水，滤过，滤液置旋转蒸发仪蒸干并保持5分钟，用正己烷溶解并缓缓转移至已处理氧化铝层析柱上，用正己烷少量多次冲洗浓缩瓶，一并注入层析柱，用40ml正己烷洗脱至流出液无色，蒸干，残渣用丙酮适量使溶解并定容至2ml，过微孔滤膜（0.45μm），即得。 4.2 含量计算 按公式（1）计算苏丹红含量 C×V R = ───── ··················（1） M R：样品中苏