t细胞表型及脾细胞分离.pptxVIP

实验一、T细胞表型测定（一） ---免疫细胞的分离、细胞涂片、固定及保存;T细胞共有标志：CD3+为总细胞 T细胞特有标志：CD4+细胞为辅助细胞， CD8+细胞为杀伤细胞。;正常值：;T淋巴细胞表面标志的检测，有助于了解机体的细胞免疫功能，对免疫缺陷病、肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、移植排斥反应等疾病的诊断、分型、预后和疗效观察有着重要的意义。;SABC-AP法测定T细胞亚群;;实验材料;实验步骤;标本制备：淋巴细胞悬液的制备;标本染色;注意事???：;观察结果;注意事项：;实验二 小鼠脾细胞分离与制备技术;实验材料：;选择小鼠，拉脱颈椎处死，用碘酒、酒精消毒皮毛。剪开皮肤，打开腹腔。找到红色的脾脏，用镊子分离后摘除。 将脾脏放入盛有5-10ml培养液的平皿中轻轻漂洗，并细心剥除脾脏周围的结缔组织。 将脾脏移入另一个盛有5-10ml培养液的平皿中，轻轻漂洗后置于100目细胞筛中，轻轻挤压使脾细胞通过筛孔进入培养液中，反复冲洗，以取得脾细胞悬液。;收集分离出的脾细胞，置于10ml离心管内加入培养液吹打，取10μl细胞，与10μl胎盘蓝染液混匀后染色并观察细胞活力，同时进行细胞计数。 细胞活力观察（台盼蓝染色）：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解