蜂胶中黄酮成分及提取方法研究.docVIP

云南大学学报(自然科学版,2006,28(S1:245~247CN53-1045/N　ISSN0258-7971 Journal of Yunnan U niversity Ξ 蜂胶中黄酮成分及提取方法研究 程伟贤1,陈鸿雁2,张义平2,谭理想1,高树鹏1,古　昆1 (1.云南大学应用化学系教育部自然资源药物化学重点实验室,云南昆明　650091; 2.云南警官学院,云南昆明　650223 摘要:对云南蜂胶化学成分进行研究,考查了乙醇浓度和浸提时间等条件对蜂胶总黄酮提取的影响,采用分光光度法测定了蜂胶中总黄酮的相对含量.对提取物的乙酸乙酯部分进行柱层析分离,得到4个黄酮成分, 运用波谱技术鉴定为高良姜素、异樱花素、槲皮素和洋芹素. 关键词:蜂胶;黄酮;结构鉴定;含量测定 中图分类号:O629.9　　文献标识码:A　　文章编号:0258-7971(2006S1-0245-03 　　蜂胶是蜜蜂采集植物的树脂分泌物与蜂蜡,经咀嚼调制而成的一种树脂状物质.蜜蜂用蜂胶加固巢脾,填补蜂巢缝隙与孔洞,涂抹巢房[1].蜂胶是一种亲脂性物质,呈黄褐色到深褐色,有时甚至呈绿色.天然蜂胶的成分因其来源、采集和用途的不同而不同.蜂胶在低温下很硬,受热后变得粘稠,因此被称为“蜂胶”[2].目前从蜂胶中分离出的主要成分有黄酮类化合物和萜烯类化合物,其它成分有对苯二酚、咖啡酸、脂类、槲皮素和木脂素[3~5].在生物活性物质中,黄酮起着决定作用.蜂胶有多功能作用,具有抗菌、抗病毒、抗溃疡、抗炎、局部麻醉、降血压、增强免疫力等作用.蜂胶对多种疾病有辅助治疗作用,尤其对咽喉肿痛、皮肤病、胃溃疡、烧伤、痔疮、牙龈炎和创伤有疗效,但有些还缺乏科学依据[6]. 1　材料和仪器 薄层层析硅胶板和柱层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品;无水乙醇、丙酮、甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂均为国产分析纯;芦丁标准品:上海试剂一厂生化试剂;蜂胶为昆明市售商品.熔点用XRC-1型显微熔点仪测定,温度计未校正; IR用Bio-Rad F TS-135型红外光谱仪测定;核磁共振仪为Bruker-300NMR,TMS为内标;质谱用U G Autospec-3000型质谱仪测定;752型分光光度计(上海精密仪器厂. 2　实验方法 2.1　提取与分离　称取蜂胶200.0g,粉碎后用石油醚(30~60℃回流3h,脱蜡后得精制蜂胶132.5g,准确称取精制蜂胶5.0g,分别用60%, 70%,80%的乙醇100mL(料液比1g∶20mL在室温下冷浸,提取时间分别为12,24,36h.过滤后减压浓缩,回收溶剂,干燥后称重,计算蜂胶粗黄酮的提取率.取蜂胶粗黄酮10.0g,用乙酸乙酯100mL ×3萃取,过滤后减压浓缩后所得浸膏6.8g,拌干硅胶上柱进行层析,洗脱剂为氯仿-甲醇体系,得到4个黄酮类化合物:高良姜素、异樱花素、槲皮素和洋芹素. 2.2　芦丁-分光光度法测定吸光度 芦丁标准液配制:准确称取干燥恒重的芦丁标准品,用30%乙醇配制成0.3m g/mL的标准溶液. 工作曲线的绘制[7]:分别取上述芦丁标准溶液2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL,分别置于25mL的比色皿中,加入5%亚硝酸钠溶液1.0mL,摇匀,放置6min后加入10%硝酸铝溶液1.0mL,6min后 Ξ收稿日期:2005-10-07 基金项目:云南省自然科学基金资助项目(2000B006M. 作者简介:程伟贤(1979-　,男,云南人,博士生,主要从事生物有机化学方面的研究. 通讯作者:古　昆(1945-　,女,教授.Email:gukun@ynu.edu.cn 加入10mL 5%氢氧化钠溶液,混匀,用30%乙醇 稀释至刻度,10min 后于510.6nm 处进行比色测定,试剂为空白参比.以芦丁的浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,对所得数据进行回归分析. 精密称取粗黄酮样品0.0628g ,溶于30%乙醇溶液中,定容至50mL ,按上述方法测定吸光度,平行测定6次,带入回归方程进行计算并分析所得实验数据. 3　结果与讨论 3.1　结构鉴定(图1　高良姜素(galangin :淡黄 色针状结晶(甲醇重结晶,分子式为C 15H 10O 5,m.p.214~215℃,EI -MS (m/z :270(M +,100, 242,213,168,136,105,77.IR (K Br (νmax /cm -1:3318,1655,1605,1600,1504.1H NMR (300 MHz ,CD 3Cl 3δ:6.37(1H ,d ,H -6,6.66(1H ,d ,H -8,8.18(2H ,m ,H -2′,6′ ,7.52(3H ,m ,H -3′,4′,5′.13C NMR (75MHz ,CD 3Cl 3δ:145.28(