_型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较.docVIP

第 7 卷 第 1 期 中 国 实 验 动 物 学 报 Vol . 7 No . 1 1999 年 6 月 Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica J une ,1999 Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较 林 红 贺永怀 黎 燕 陆应麟 沈倍奋3 3 3 3 ( 中国协和医科大学 中国医学科学院药用植物研究所 ,北京) ( C Ⅱ- A) 和弗氏完全佐剂 (A - A) 大鼠关节炎模型在大体外观 摘要 目的 对 Ⅱ型胶原蛋白 和足部组织病理学切片等方面进行观察比较 。方法 分别采用 Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导 建立大鼠关节炎模型 ,利用排水法对大鼠足部体积进行测定 ,并将大鼠后足进行组织病理学切片观 察 。结果 从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变 ,但 C Ⅱ- A 大鼠 与 A - A 大鼠比较 ,滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显 ,关节炎持续时间也较长 ,更 接近于人的类风湿性关节炎 。结论 C Ⅱ- A 大鼠模型与 A - A 相比是研究 RA 较为理想的动物模 型 。 关键词 类风湿性关节炎 型胶原蛋白大鼠关节炎 弗氏完全佐剂大鼠关节炎 RA) 是以慢性多关节炎症为主要表现的全身性自身 免疫性疾病 , 。在 RA 中 , 滑膜的持续性增生和软骨及骨的破 。RA 的动物模型有多种 , 其中较为经典的是弗氏完全佐剂诱导的 大鼠关节炎和 Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠关节炎模型。本文将对这两种大鼠关节炎模型的大体 外观、足部肿胀程度以及组织病理学观察等方面进行比较研究 , 以选择更为理想的动物模 型。 材料与方法 1 实验动物 Wistar 大鼠 ,雌性 ,4～6 周龄 ,30 只 ,由军事医学科学院动物中心提供。 ( C2 主要试剂 牛源性 Ⅱ型胶原蛋白 ollagen Ⅱ, C Ⅱ,from bovine nasal septum) ,酸可溶 ( Freund’性 ,美国 Sigma 公司产品 ;弗氏不完全佐剂 s Adjuvant Incomplete , FIA) 美国 Sigma 公司 (BCG) 购于北京卫生部生物制品研究所。 产品 ;卡介苗 3 大鼠关节炎的诱导方法 Ⅱ型胶原蛋白诱导的大鼠关节炎模型的建立 参照文献〔1〕的方法 ,将酸溶性 Ⅱ型胶原蛋 (collagen Ⅱ, C Ⅱ) 用弗氏不完全佐剂配成 μl 乳 白 C Ⅱ浓度为 215mgΠml 的乳剂 ,按每只大鼠 100 μg ,于左后足跖皮内注射致炎。佐剂性关节炎的诱导按照常规方法剂含 C Ⅱ250〔2〕:将卡介苗 (BCG) 于 ( 终浓度 10mgΠ80 ℃灭活 1h ,加入到弗氏不完全佐剂中 ml) ,充分乳化混匀制成弗氏完 ( FCμl ;用注射 μl 生理盐水Π全佐剂 A) ,每只大鼠注射 100100只的大鼠作为正常对照组。 2 中 国 实 验 动 物 学 报 第 7 卷 4 大鼠关节炎足体积的测定方法〔3〕 采用排水法测足部体积 : 在大鼠足部踝骨关节突出部位划一条线作为标记 ,用一特制量 筒 ,灌满水后 ,将大鼠足部插入 ,使水面与踝骨上的标记处于同一界面 ,另用一个烧杯接从量筒 侧口排出的水 ,测量排出水的体积 ,即为所测大鼠足部的体积 ,每只足每次测量重复 5 次。 5 大鼠足部病理切片制备 乙醚麻醉引颈处死大鼠后 ,切取掌趾部 ,立即放入缓冲福尔马林溶液中固定 ,常规梯度乙 μm , HE 染色观察。 醇脱水 ,石蜡包埋、切片 ,片厚约 3～5 结 果 1 注射诱导后大鼠的外观变化 ( C Ⅱ- A) 、随机将大鼠分成 3 组 ,每组 10 只 ,分别用于 Ⅱ型胶原蛋白诱导处理组 弗氏完 (A - A) 和正常对照组 ( C全佐剂诱导处理组 ontrol) 。C Ⅱ和 FCA 注射诱导后第二天 ,大鼠注射 足即有明显的肿胀 ,出现急性免疫反应。第 14～21d 后 ,C Ⅱ诱导组大鼠对侧足出现红肿 ,至第 35～45d 后 ,大鼠前足出现红肿 ,并有关节变形。而 A - A 大鼠则到注射后第 18～25d 左右才 出现对侧足的肿胀。 ,C Ⅱ- A 大鼠关节炎的持续时间较长 ,到四个月后 肿胀仍较明显。A - 。如图 1～3 。 图 1 正常大鼠注射后第 35 天的外观图 图 2 A - A 关节炎大鼠注射后第 35 天的外观图 第 1 期 Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较 3 图 3 C Ⅱ关节炎大鼠注射后第 35 天的外观图 2 C Ⅱ诱导关节炎的大鼠足体积改变 用排水法测量大鼠足部体积 ,观察到注射后第 14～21 天 C Ⅱ- A 大