液相色谱—质谱联用基本原理与应用lcms.ppt

AMOZ-D5 AOZ AHD AHD内标（选252/134 ） SEM内标（选212/195） 第三步：以第二步选定的离子对，例如335.1/262.2 等，做MRM SCAN 。 第四步：通过软件操作优化各种参数，如温度、气流等。 第五步：接好色谱柱，编辑LC梯度洗脱，进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，否则调节流动相，优化色谱条件。 第六步：用空白提取液配制同样浓度标样，按上一步方法进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，峰高有无变化，有无离子抑制现象，否则调节流动相，优化色谱条件。 第七步：用空白提取液配制一系列不同浓度硝基呋喃代谢物标样，按上一步方法进样，例如，分别稀释为浓度0.25ug/kg, 0.5ug/kg, 1.0ug/kg, 2.0ug/kg, 4.0ug/kg, 8.0ug/kg, 等等。  第九步：按上述方法采集数据，做标准曲线,并进行硝基呋喃代谢物样品的测定。如果4种同位素内标齐全，则定量时一一对应计算，如只有AOZ-D4和AMOZ-D5，则1种内标可对应2种硝基呋喃代谢物。 SEM结果1 SEM线性 谢谢! 联系方式: 洪爱华 生命科学技术学院二楼实验技术中心分析测试室217 低质量截止 (1/3 效应) 低碰撞效率 （离子缺失） 多电荷增强扫描功能：有效消除单电荷离子的干扰，只检测多电荷离子，更适合检测微量的肽或蛋白质 ?MS3功能：MS3功能和串联四极杆碰撞方式，只需进行最少的实验却提供最充分的结构信息 ?动态线性范围宽保留3Q质谱仪的优异MRM定量性能，能够检测复杂基质中的微量杂质 QTRAP实现MSn功能 以利血平为例: 第一步做母离子609的MS2谱，由于碰撞能量较高，既有一次碰撞碎片又有多次碰撞碎片，且无1/3质量CUT OFF现象，故从低质量端到高质量端产生碎片很多。 每个碎片均可做MS/MS/MS，从中确证下一级的碎片归属，进而推断分子结构。 例如M/Z236和M/Z195是由M/Z448产生， M/Z365和M/Z174是由M/Z397产生。 M/Z365,M/Z236和M/Z195还可继续打碎。 RESERPINE-MS/MS RESERPINE-MS/MS/MS（448） RESERPINE-MS/MS/MS（397） RESERPINE-MS/MS/MS（365） RESERPINE-MS/MS/MS（195） LC-MS技术的应用 以大气压电离为接口的LC-MS技术已经在药物、化工、临床医学、分子生物学等许多领域中获得广泛的应用 具体应用领域 医药学：药物代谢、药物动力学、杂质分析、天然产物分析 生物化学：肽、蛋白质、寡核苷酸、糖 环境化学：农药和农残分析、有机污染物、土壤/食品/水分析 临床医学：新生儿检查、糖化血红蛋白（糖尿病）、血红蛋白变异、胆酸 食品科学：香料、添加物、包装物、蛋白质、致癌物 法医学：滥用药物、爆炸物、兴奋剂检测 兽医学：兴奋剂、磺胺类药物、抗体 合成化学：有机金属化合物、有机合成物 有机化学：表面活性剂、染料 药物代谢研究 药物代谢与药物动力学研究技术上的最新重大进展是LC-MS-MS的使用，电喷雾（ESI）和大气压化学电离（APCI）以及大气压光电离（APPI）是其主要的离子源，由于具有高灵敏度（ng/ml~pg/ml），高选择性（检测特定的碎片离子）、高效率（每天可检测几百个生物样品和对药物结构的广泛适用性，对液态样品和混合样品的分离能力高，可通过二级离子碎片寻找原型药物并推导其结构，LC-ESI-MS-MS已广泛地应用于药物代谢研究中一期生物转化反应和二期结合反应产物的鉴定、复杂生物样品的自动化分析以及代谢物结构阐述等，已在世界上大型制药企业中取代HPLC而占据了主导地位，其测试的样品量占总量的70%以上。 天然产物天然药物的研究 目前中药开发研究有两条途径。一条途径是从单一植物中提取一种有效成分(单体化合物)或提取物开发成新药。另一途径则是中药复方制剂的开发研究。 采用现代多种仪器联用新技术，特别是高效液相色谱/质谱/质谱联用(HPLC-MS/MS)，可对其十几种乃至几十种化学成分进行指纹图谱分离鉴定。再从指纹图谱中选择四、五种指标成分(有效成分或特征成分)进行定量，可以确定出简化的指纹图谱和指标成分，又是最合理的中药复方质量控制的方法，是研究中药复杂体系，尤其是复方的有力工具。国内外很多学者已进行了复方丹参、清开灵、泻心汤、人参或党参制剂等中药中的主要成分的分析。 临床诊断和疾病生物标志物的分析 欧美等目前已广泛采用HPLC/MS/MS法用于临床诊断以及疾病生物标志物的研究、检测，具有专一性好、灵敏度高、成本低、分析快速，经济效益可观等特点。目前可进行新生儿遗传疾病筛选（PKU、MCAD