第七章 生物可降解塑料.ppt

胞中积累的PHAs存在形式 以单个粒子的形态存在，每个细胞含有的颗粒数量的大小随微生物种类而不同，在Ralstonia eutropha中，每个细胞含有8-10个颗粒，每个颗粒直径大小为0.2-0.5μm； 以非晶体形式存在。具有高度的折光性，颗粒外面包裹着一层膜，没有生物膜那样的典型双层结构，膜中含有PHAs合成酶的降解酶系统。 * Scanning electron microscope of PHB granules in Ralstonia eutropha * 补料分批培养45h收获的菌体细胞的电镜照相 * PHAs的代谢途径 不同微生物合成PHAs的途径不同，基质不同其合成途径也有差异(图7-2) 。 ①真养产碱杆菌及多数细菌从糖合成PHB； ②深红红螺菌从糖合成PHB； ③食油假单孢菌等从链烃、醇及酸合成具有与基质链长有关的HA单位的PHAs； ④一株产碱杆菌从长链偶碳脂肪酸合成PHB； ⑤铜绿假单孢菌等从糖质碳源(如葡萄糖酸)合成具中链HA单位的P HAs； ⑥真养产碱杆菌等利用糖加丙酸合成PHBV。 HA-羟基烷酸 * A * PHAs的生物合成和降解同时存在 的 丁酰CoA * 基因重组细菌 20世纪80年代后期开始将重组DNA技术应用于生物合成PHB，来自于多种细菌的PHA生物合成酶——PHA生物合成途径的关键酶，已被在分子水平进行了详细的研究， PHA生物合成酶基因已被克隆成功。 3个实验室独立地将真养产碱杆菌H16的PHB生物合成基因phbA、phbB和phbC克隆并在大肠杆菌中表达。 * 基因重组细菌 研究发现，在真养产碱杆菌中，PHA合成酶的结构基因排列在称为phbC-A-B的一个操纵子上，分别编码PHA合成酶、β-酮基硫酯酶和依赖于NADPH的乙酰乙酰CoA还原酶(见图7-4)。 * 三、PHAs的发酵生产 PHAs实现大规模工业化生产的主要障碍是生产成本。英国帝国化学公司(ICI)认为影响PHAs生产成本的主要因素有 菌种 原料 操作方式 提取方法 * 因而降低PHAs的生产成本主要措施 (1)采用廉价基质(如CO2、H2和O2，甲醇，乙醇，葡萄糖及来自农业废物的有机酸等)和提高产物对基质的产率系数，降低发酵原材料的成本； (2)提高生产强度(如选育高产菌株、采用合适的发酵生产方式等)，以降低操作成本； (3)改进提取、纯化技术(如不采用价格昂贵的有机溶剂、简化操作等)，以降低提取成本。 * PHAs的流加发酵 在PHAs的生产中，通常采用分批发酵法和流加发酵法，有时用连续培养法来获得高的生产强度。 由于Ralstonia eutropha只有在某种营养成份氮、磷或氧等缺乏而碳源过量的不平衡生长条件下才能大量积累PHAs，一般可将发酵过程分成两个阶段来进行控制： 第一阶段为菌体细胞的形成阶段，在此阶段微生物利用基质形成大量菌体，而多聚体PHAs的积累量很少； 第二阶段为多聚体形成阶段，当培养基中某种营养耗尽时，细胞进入PHAs形成阶段，在此阶段PHAs大量形成而菌体细胞基本上不繁殖。 * 延长细胞的对数生长期，从而可获得较高的菌体浓度； 减少菌体细胞在生长阶段积累多聚体，也需通过流加法来控制培养液中氨离子浓度不小于200 mg/L，否则会降低共聚体的最终产率。 在多聚体形成阶段，限制氮源能刺激细胞积累PHAs，但氮源的完全缺乏会极大地损害微生物细胞的合成活性，所以将在PHAs合成阶段以较低的速率限量流加氮源。 PHAs的流加发酵 * 四、PHAs的提取技术 有机溶剂法 次氯酸钠提取法 酶法 表面活性剂-次氯酸钠法 其他方法 * 1. 有机溶剂法 对于由真养产碱杆菌(Ralstonia eutropha)生产PHB，研究初期通常采用的提取方法是有机溶剂法。包括 : 氯仿、二氯乙烷、1,1,2—三氯乙烷、乙酸酐、碳酸乙烯酯及碳酸丙烯酯等。 原理：有机溶剂一方面能改变细胞壁和膜的通透性，另一方面能使PHB溶解到溶剂中，而非PHB的细胞物质(NPCM)不能溶解，从而将PHB与其它物质分离开来。具体操作步骤如图7-5所示。 * 图7-5 有机溶剂提取PHB的过程示意图 * (1)当溶剂中含有超过5%(w/v)的PHB时，溶液变得很粘，要去掉细胞的残余物就变得很困难； (2) 提取率难以达到很高； (3)使用大量的有机溶剂； (4)造成严重环境污染，操作不便。 因此，用有机溶剂提取PHB通常作为一种实验室方法。 有机溶剂的方法的缺点 * PPT课件 生物可降解塑料的生产和应用 Dr Zhou Hongbo Department of Biotechnology CSU * PPT课件 第一节 塑料废物污染和可降解塑料 二十世纪七十年代以来塑料工业得到迅猛的发展，无论是工业、农业、建