DNA重组技术应用的基本工具.pptVIP

基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 质粒（常用） λ噬菌体衍生物 动植物病毒 关于内含子和外显子的说法正确的是 （ ） A .内含子和外显子在转录的过程中都能够转录成成熟的mRNAB.只有外显子能够转录成mRNA，tRNA，rRNAC.原核细胞基因中也有内含子和外显子D.由于内含子不能编码蛋白质，故它属于非编码区 知识拓展 B 原核细胞基因的编码区是连续的,只有编码区和非编码区！没有内含子和外显子之分。不存在内含子.真核细胞基因的编码区是间隔的、不连续的,真核生物才有内含子和外显子。真核生物的基因组成是编码区和非编码区,其中编码区是由外显子和内含子组成的,但是其中内含子又是非编码序列,所以说真核细胞基因结构中，非编码区和内含子是非编码序列 。 3.类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ 共同点： 不同点： A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶的作用 返回 DNA聚合酶:是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接到正在合成的DNA单链中，形成一条与模板链互补的DNA链； DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 1.形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 2.化学本质都是蛋白质（但组成和性质各不相同） 基因进入受体细胞的载体 　　 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。 载体需要的条件： 　⑴有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 　⑵对受体细胞无害 　⑶能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存 　⑷有某些标记基因，便于筛选 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制，转基因生物能有预想的效果吗？ 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　⑵霍乱菌的质粒有多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 作为运载体需要什么条件吗？ 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 1、载体的作用 将 转移到受体细胞中去。 目的基因 2、种类 质粒（常用，最常用的质粒是大肠杆菌的） λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 3、分布：存在于许多细菌以及酵母菌等生物中。 质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内成。 1）质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并且具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 4、质粒是基因工程最常用的载体。 2）质粒DNA上有一个或多个限制酶的切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中。 3）携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，在细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。 4）质粒DNA上有特殊的标记基因，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 大肠杆菌质粒的分子结构示意图 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 5）真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行人工改造的。 1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组DNA的筛选。 4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 2 7 4 8 3 6 1 5 思考与探究 P7 （2