《微生物基本试验原理及操作》.pptVIP

胆汁七叶苷试验 原理：在10-14%胆汁存在下，测定细菌水解葡萄糖苷七叶苷为七叶亭和葡萄糖的能力。 胆汁七叶苷培养基成分 蛋白胨 5g 牛肉浸膏 3g 牛胆汁（胆汁）40g 七叶苷 1g 柠檬酸铁 0.5g 琼脂 15g 蒸馏水 1000ml 结果：培养基变为黑色或深褐色为阳性。有生长物时，并不表示七叶苷裂解，仅表示胆汁浓度不能抑制D群链球菌外的细菌生长。 各种酶类试验 过氧化氢酶（触酶）试验 氧化酶试验 血浆凝固酶试验 硝酸盐还原试验 胆汁溶解试验 环腺苷酸（cAMP）试验 过氧化氢酶（触酶）试验 原理：有些细菌具有过氧化氢酶，能将过氧化氢酶分解为水。 试剂：3%过氧化氢溶液。 方法：①玻片法：用牙签挑取18～24小时培养的菌苔，置于洁净的玻片上，滴加3%过氧化氢溶液1～2滴。②试管法：取不含血液的18～24小时培养物一接种环于试管内，加入1ml 3%过氧化氢溶液。3%过氧化氢溶液应置于棕色瓶内冷藏。 结果：产生大量气泡为阳性，不产生气泡为阴性。 血浆凝固酶试验 原理：凝固酶能凝固血浆纤维蛋白，是鉴定金黄色葡萄球菌的主要试验。本试验分玻片法和试管法，玻片法主要是检测结合凝固酶，试管法是为了肯定玻片法试验结果和对玻片法试验阴性者进行复查，检测游离凝固酶。 血浆凝固酶试验 原理：结合凝固酶为金黄色葡萄球菌细胞表面含有，游离凝固酶为金黄色葡萄球菌产生的一种胞外酶，两酶均可作用于血浆中的纤维蛋白原，使其转变为纤维蛋白，形成凝块。 方法： 玻片法：在玻片上加一滴灭菌生理盐水，取葡萄球菌18-24小时肉汤培养物一环，或挑取平板上一个单个菌落制成浓菌悬液，再加一接种环新鲜人或兔血浆与菌悬液混匀。同时做阳性菌和阴性菌对照试验，立刻观察凝块的形成。本试验应先在生理盐水中乳化，检查有否自凝现象。防止出现假阳性结果。阳性结果一般在5-20秒内出现，若3-4分钟后仍无凝固，可考虑为玻片法试验阴性。 试管法：将洁净小试管中加0.5ml未稀释的人或兔血浆，加0.5ml培养18-24小时的葡萄球菌肉汤培养物一满环，或挑取平板上的纯菌落，轻轻转动（不要摇动）试管混匀。放35水浴中4小时，每隔30分钟检查一次有无凝固。检查时不要振动或摇动试管，可轻轻将试管倾斜以观察有无凝块。大多数金黄色葡萄球株在35℃4小时可以凝固血浆，如果阴性对照。枸椽酸盐抗凝的血浆可产生假阳性结果。 氧化酶试验 原理：某些细菌具有氧化酶，在有氧和细胞色素C时，使还原型细胞色素C氧化，氧化型细胞色素C再使二甲基对苯二胺氧化，产生玫瑰红至暗紫色。有时菌落本身带有红色，不易观察，可再加入a-萘酚乙醇溶液，使生成深蓝色的靛酚蓝。 ? 试剂： 1．? 1%盐酸二甲基对苯二胺（或四甲对苯二胺）水溶液 2．? 1%a-萘酚95%乙醇溶液 方法：取18-28小时的新鲜培养物，用无菌滤纸条，蘸取菌落少许，滴加1%盐酸二甲基对苯二胺1-2滴，观察结果。 结果：一分钟内出现紫红色为阳性。若菌落本身有色素，则再滴加a-奈酚1-2滴，出现蓝色则为阳性。 硝酸盐还原试验 原理：硝酸盐还原反应有两个过程，其一是硝酸盐还原为亚硝酸盐，其二是继续将亚硝酸盐进一步分解为氨、氮、氧化氮等气体终末产物。 硝酸盐还原试验培养基成分 蛋白胨 1g 硝酸钾 0.1g 蒸馏水 100ml 方法：将待检菌接种于硝酸盐培养基中，35℃培养1-4天，将甲、乙试剂各加0.1ml于试管内，混匀观察结果 结果：出现红色为阳性。如无红色出现，应加少量锌粉，如仍无红色说明亚硝酸盐进一步分解成氮、氨等气体，应判为阳性；如加锌粉出现红色，说明还原剂锌粉使硝酸盐还原为亚硝酸盐，待检菌无还原硝酸盐的能力，为阴性。 胆汁溶解试验 原理：在特定时间和温度条件下测定胆盐溶解细菌的能力。溶菌的机理尚未定论，有人认为胆盐或胆汁能激活肺炎链球菌的自溶酶，使菌体发生溶解。 试剂：10%去氧胆酸钠溶液或牛胆汁 平板法：10%去氧胆酸钠溶液一接种环，加于血琼脂平板的试验菌落上，置于35孵育30分钟，肺炎链球菌菌落消失为阳性。阴性者菌落仍存在。 环腺苷酸（cAMP）试验 原理：B群链球菌（无乳链球菌）能产生一种因子（cAMP因子），这种因子在绵羊血或牛血培养基上与金黄色葡萄球菌β-溶血素起协同作用，促进β-溶血素的活性。因此在两种细菌的交界处溶血力增加，出现箭头形溶血区。 方法：首先在羊血平板上接种一长条金黄色葡萄球菌（药敏质控菌）再将被检菌与金黄色葡萄