第三讲 高效液相色谱的原理与构造.ppt

分离度方程：分离因子α项 当α值很小的时候，其很小的变化也可引起R值较大的变动；当α值很大的时候，此项接近1。 * PPT课件 分离度方程：柱效N项 分离度R与理论塔板数的平方根成正比 * PPT课件 色谱峰对称性的测量方法 * PPT课件 四、HPLC的构造 * PPT课件 * PPT课件 4.1 真空脱气机 系统中气泡的产生： —流动相本身存在，梯度淋洗混合后放出气泡； 气泡的影响： —存在于管路中，系统压力不稳定，实验结果有偏差； —存在于单向阀中，易造成液体回流，流量不准确，甚至是 不吸液； —存在于检测器中，出现鬼峰，影响检测准确性。 * PPT课件 如果所用泵在低压端进行溶剂混合（如 Agilent 1200 系列四元泵），则需要进行脱气，因此必须配备一台真空脱气机或其他脱气系统（如用氦气进行脱气）。 单元泵和高压混合泵则通常不需要进行脱气。但在下述情况下，对于等度洗脱或高压混合泵也建议使用真空脱气机： —如果在低 UV 波长段、用最高的灵敏度进行检测， —如果分析要求使用最佳的进样精度，或 —如果分析要求保留时间重现性很高（在流速低于 0.5 ml/min 时必须使用）。 —如果样品或检测对流动相中溶解的氧敏感（降解）。 * PPT课件 溶剂瓶中的溶剂在 LC 泵的抽取下流过真空箱内的特殊管状塑料膜。当溶剂经过真空管时，溶剂中溶解的气体将渗过塑料膜进入真空箱。当溶剂离开真空脱气机的出口时，几乎已被完全脱气。 Agilent 1200 系列真空脱气机（G1322A 型）由一个四通道（有四个管状塑料膜）真空箱和一个真空泵构成。打开真空脱气机后，控制电路即开启真空泵，真空泵运行使真空箱内产生部分真空。其压力由压力传感器测定。根据压力传感器的信号，真空脱气机通过打开或关闭真空泵来维持部分真空。 * PPT课件 4.2 四元泵 高压输液泵：最高压力可大400 bar； 四通道：方便使用，比如：A通道——水，B通道——乙腈，C通道——甲醇，D通道——临时流动相。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 * PPT课件 四元泵包括一个溶剂槽、一个真空脱气机和一个四通道梯度泵。四通道的梯度泵包括一个高速配量阀和一个泵组件。它通过低压混合来产生梯度。 * PPT课件 四元泵的液路图 * PPT课件 4.3 自动进样器 * PPT课件 流路中为高压力工作状态； 通常使用耐高压的六通阀进样装置； 其结构如图所示： * PPT课件 4.4 手动进样器 Agilent 1200 手动进样器使用Rheodyne 7725i （罗丹尼）七通进样阀。样品经阀前部的进样口打入外接于阀的20 μl 样品环。 阀内有陶瓷固定片和Vespel? 进样密封。当阀在进样和充样位置之间来回切换时，固定片上的先合后开通路确保流量不被中断。 阀装在钢制 固定杆上，并 能装在LC 系统 两侧。 * PPT课件 充样位置： —在充样位置 ，泵直接和柱子联接( 孔2 和孔3 联接)，并且针口和样品环联接。至少2 到3 倍样品环体积的样品通过针口注入，以便达到好的精度。样品填入环内，过量的样品通过和孔6 联接的排放管排出。 * PPT课件 进样位置： —在进样位置 ，泵和样品环联接( 孔1 和孔2 联接)。将全部样品从环冲洗到柱。针口和排泄管( 孔5) 联接。 * PPT课件 4.5 柱温箱 Agilent 1200 系列柱温箱是用于 LC 的叠放式温度控制柱温箱。它即可作为单独模块使用又可作为 Agilent 1200 系列系统的一部分使用。用它来加热和冷却色谱柱，以达到保留时间重现性的最高要求。 * PPT课件 PPT课件 “知本”培训教材一（0281 浙江工业大学 发酵工程研究所 浙江工业大学 发酵工程研究所 第三讲 高效液相色谱(HPLC)的原理与构造 陆跃乐 浙江工业大学 发酵工程研究所 * PPT课件 内容概要 一、高效液相色谱简介 二、高效液相色谱的固定相和流动相 三、高效液相色谱分离公式与术语 四、液相色谱仪的基本配置 五、检测器的种类和用途 六、色谱柱简介 * PPT课件 一、 什么是HPLC？ 高效液相色谱： — HPLC (High Performance Liquid Chromatography ) —是一种区别于经典液相色谱，基于仪器方法的高效 能分离手段：高性能色谱柱，高精度输液泵，高灵 敏度检测器… —广泛应用于各个领域: 医药，环保，石化，生命科学，食品，农业… —无论在技术上，理论上，还是在