《微生物的无菌操作及接种技术》.pptVIP

微生物无菌操作技术 接种技术 工业生产中的微生物接种 ;一、微生物无菌操作技术;1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀;一、微生物无菌操作技术;二、原理： 无菌技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。;接种的准备工作 无菌环境的要求与保持 进入无菌室前的准备 无菌操作的要求 接种的操作方法;无菌环境;（1）无菌室的结构： 应有更衣间、缓冲间、操作间 应有良好的通风条件，安装空调设备及过滤设备;无菌室的结构;（2）无菌室的消毒和防污染 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖动态。;2、超净工作台;垂直流超净工作台 ;超净台的使用与维护;3、无菌器材准备;（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min； （3）检查无菌器材是否完备； （4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、鞋。;（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。 ;无菌操作要求;无菌操作要求;接种的基本程序 常用接种方法 斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种 ;1、接种的基本程序;2、常用的接种方法;※ 斜面接种： 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。 用于好气性微生物的接种。;标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 点燃酒精灯。 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌;※ 斜面接种;※ 斜面接种;※ 斜面接种;※ 斜面接种;斜面接种示意图;由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作方法： 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉塞再轻轻摇匀。 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种 ;2、常用的接种方法;2、常用的接种方法;分区划线法;连续划线法;用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。 用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。 只适宜于细菌和酵母的接种培养;穿刺接种方法： 1) 标记 2) 点燃酒精灯 3）接种 （1）手持试管 （2）旋松棉塞 （3）接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌 ;（4）拔出棉塞 （5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种 （6）穿刺：将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基，至接近试管底部，然后沿接种线拔出 （7）塞上棉塞 （8）接种针灼烧灭菌;1、什么是无菌技术？ 2、如何做好无菌室的消毒和防污染工作？ 3、如何做好超净台的使用与保养？ 4、无菌操作的目的是什么？ 5、进入无菌室前要做好哪些准备工作？ 6、验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？ 7、?接种时，为何要尽量使试管平放？ 8、穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？ ; 工业生产中培养的菌种接入种子罐时，一般先制成菌悬液。 常用的方法有压差法、火焰封口法等。 1 、火焰封口法 种子罐的接种口周围设有沟槽，接种时先在沟槽里注入少 量酒精，然后用火焰点燃酒精，使接种口被包围在一堆火 焰之中，接着将菌悬液倒入种子罐中即可。 ;2 、压差法 先用棉花球蘸消毒剂覆盖在种子罐接种口的橡皮塞上，消毒5 ～ 10min ，将连接在盛有菌悬液的容器上的接种针头迅速插入接种口的橡皮小孔中，然后平衡种子罐与盛菌悬液的容器之间的压力，接着降低种子罐的压力，菌悬液就会注入到种子罐里。接种完后，再用消毒剂拭净接种口的小孔。 ;dsfdbsy384y982ythb3oibt4oy39y409705923y09y53b2lkboi2y58wy0ehtoibwoify98wy049ywh4b3oiut89u983yf9ivh98y98sv98hv98ys9f698y9v698yv98x98tb98fyd98