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重组梅毒螺旋体抗原的研究进展 摘要 nbsp;在梅毒螺旋体人工培养尚未获得成功的情况下，基因克隆 （即 DNA 重组）技术的出现为该病原的研究开辟了一条新的途径。应用基因工 程技术目前已制备出多种重组梅毒螺旋体抗原，这些抗原的制备对梅毒发病机 理的探讨、疫苗的研制、以及血清学诊断试验的建 　　尹跃平 国外医学皮肤性病学分册 1999 年第 25 卷第 6 期 　　 摘要 在梅毒螺旋体人工培养尚未获得成功的情况下，基因克隆（即 DNA 重组） 技术的出现为该病原的研究开辟了一条新的途径。应用基因工程技术目前已制 备出多种重组梅毒螺旋体抗原，这些抗原的制备对梅毒发病机理的探讨、疫苗 的研制、以及血清学诊断试验的建立与应用具有重要意义，为梅毒的预防和控 制提供了更加有效的手段。 　　一、概况 　　梅毒是一种临床表现极为复 杂，几乎可累及全身各器官的性病。尽管本世纪 40 代年发现了治疗梅毒的理想 药物——青霉素，但目前该病在全球仍然是一项重要的公共卫生问题[1]。目前 尚未解决梅毒的病原体——梅毒螺旋体（Treponema pallidum,TP）的人工培养 问题，从而阻碍了对 TP 致病机理探讨、疫苗研制、以及梅毒血清学诊断技术开 发等方面的深入研究。80 年代初，随着分子生物学技术的发展，特别是基因工 程（DNA 重组）技术的出现使梅毒螺旋体的研究进入一个新的阶段[2]，目前， TP 的全部基因组 DNA 序列已经被解析[1]。通过重组 TP dNA 的克隆以及在大肠 杆菌中的表达，制备出多种重组 TP 抗原，为梅毒的研究提供了一条新的途径。 现就近 10 年来有关重组 TP 抗原的研究现况进行复习。 　　二、重组 TP 抗原 的特性及制备 　　目前已重组的 TP 抗原有近 20 多种，如 TpN15、TpN17、 TpN19、TpN29～35（TpD）、TpN44.5（TmP a）、TpN47、TpN35(Tmp c)等[3]。 现将其中部分有应用前景的重组 TP 抗原分述如下。 　　（一）TP15kD 抗原 [4]：15kD 蛋白是一种脂蛋白，首先由 Hensel 等 1985 年分离鉴定，它在 TP 膜 蛋白中的含量相对较少，但在免疫印迹试验中与人梅毒血清间显示了超强的反 应性，同时对实验梅毒兔的淋巴细胞有很强的增生反应，表明 15kD 蛋白不仅具 有较强的体液免疫原性，而且有较强的细胞免疫原性，但 Centurion-Lara 等[5] 实验表明，此蛋白对 TP 感染没有任何免疫保护性。重组 15kD 抗原基因由 Norgard 等用特异的单克隆抗体从 TP 基因库中筛选得到[4]。其最新报道的表 达质粒为 pMALc2[5]，该质粒在 DNA 插入位点的上游含有麦芽糖结合蛋白基 因，使表达的融合蛋白易于分离和提纯。 　　（二）4D 抗原：4D 抗原是分子 量分 19kD 的一种 TP 外膜蛋白，Radolf 等[6]研究发现无论是自然状态还是重 组 4D 蛋白都由二巯键交叉相联成寡聚结构，且耐蛋白酶，表明 4D 抗原可能在 TP 外膜保持完整结构中起着非常重要的作用。重组 TP4D 抗原首先由 Feniger 等在 E coli RRI 大肠杆菌中表达和分离提纯[7]。Borenstein 等用肌注和静脉 注射的方法探讨了重组 TP 4D 抗原对实验性梅青的影响，显示以 4D 抗原免疫动 物后能够改变实验梅毒的病程，表明 4D 抗原免疫实验动物后，可对感染梅毒产 生部分保护的作用。提示重组 TP 抗原是制备疫苗的又一可能途径。 　　 （三）TP24 kD 抗原：此重组蛋白是以质粒 pUC8 为载体在大肠杆菌中表达的一 种分泌蛋白[8]，具有很强的免疫原性，其编码 TP24kD 抗原的 DNA 序列仅存在 于致病性的 TP 基因中，而非致病性 TP 中不存在此 DNA 序列，提示 TP24kD 抗原 与 TP 的致病性相关，但与 TP 致病性的关系有待进一步研究。Hsu 等人的实验 发现，重现 24kD 的表达可以改变大肠杆菌的生长形态，出现与一般大肠杆菌不 一样的扁平粗糙的菌落和丝状样生长，表明 24KD 抗原与 TP 的生长特性相关。 　　 （四）TmP A 和 TmP B：TmP a 是一个分子量为 42kD 的 TP 膜蛋白。Schouls[9] 等构建了能在大肠杆菌 K-12 中大量表达该重组蛋白的质粒载体 pPLc245。 Ijsselmuiden 等[10]用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法探讨了重组 TmPA 抗 原在血清学诊断中的意义，通过对 148 例未治疗和 167 例已治疗的梅毒血清以 及 190 例非梅毒血清进行了检测，其敏感性分别为：一期梅毒 76%、二期梅毒 100%、早期稳性梅毒 9