microbialgenetics细菌和放线菌的基因重组和遗传分析.pptxVIP

;第一节 转化作用（Transformation）;A. Transformation;free DNA;;Griffith in 1928, 肺炎双球菌转化现象 自然转化的原核生物种类 大肠杆菌 肺炎双球菌 枯草芽孢杆菌 流感嗜血菌;Griffith转化研究(1928);二、转化作用过程;1、感受态出现; Competence :The capacity of cells to take up free DNA;感受态：在特定生长阶段或特定条件下出现，一般出现在细胞对数期后；不同细胞维持感受态时间不同； 实验：肺炎双球菌抗链霉素菌株DNA 转化无抗性菌株 ;感受态诱导;对数生长期的大肠杆菌(受体菌)悬浮于冰预冷的低渗0.1mol/L氯化钙???液中处理15-30min ???使细菌细胞膜通透性增加（成为感受态细胞） 向大肠杆菌中加入外源DNA，使之吸附于细胞表面???42℃短暂的热处理，促进外源DNA进入感受态细胞.;③ 对于不能自然形成感受态的细胞，可以采用 PEG（聚乙二醇）诱导转化, 这类细菌首先用细胞壁降解酶除去肽聚糖层，在PEG存在下，质粒和噬菌体DNA可以高效导入原生质体。 ---例如：Bacillus subtilis利用 PEG技术可以使80%的细胞被转化，107转化子?ug质粒DNA。;④对于不能自然形成感受态的细胞，也不能诱导产生感受态的细胞，可以用