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现代检测技术2013秋 色谱分析法基本理论 概要 色谱基本知识 色谱基本原理 色谱术语 色谱热力学与动力学 色谱定量分析 色谱：是一种分离技术，利用不同物质在固定相与流动相之间分配能力不同实现多组分混合物的分离。 色谱分析法：色谱分离技术应用于分析化学领域所建立的一类分离分析方法，又称色层法，层析法。 色谱分析原理 色谱原理--分离过程 色谱术语 –色谱流出曲线、基线 色谱流出曲线：试样中各组分经色谱柱分离，先后流出色谱柱，由检测器得到的信号随时间变化的曲线。 基线：色谱柱后没有组分通过检测器时，仪器记录到的信号称为基线。随时间变化的检测器系统噪声。 稳定的基线是一条直线。 色谱术语 --峰高、峰面积、峰宽 峰高：色谱峰最高点与基线之间的距离（h）。 峰面积：组分色谱流出曲线与基线所围成的面积。 峰宽：半峰宽W1/2—峰高为一半处的宽度。 基线峰宽W—峰两边拐点处作切线与基线相交两点的距离。 色谱术语 --保留值 保留时间：从进样到组分在检测器出现最大浓度的时间叫该组分的保留时间，用tR表示。 保留体积：从进样到组分在检测器出项最大浓度时所通过的载气体积称保留体积，用VR表示。 死时间：不被固定相吸附的组分（如空气、甲烷）的保留时间称为死时间。用tM表示。 色谱术语 --保留值 死体积：色谱柱柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路连接头间及检测器的空间总和。用VM表示。 调整保留时间：扣除了死时间的保留时间，用tR’表示。 tR’ ＝ tR － tM 调整保留体积：扣除了死体积后的保留体积，用VR ’表示。 VR ’ ＝ VR － VM 相对保留值 保留指数I 色谱术语 –分配系数、容量因子 分配系数：在一定温度和压力下，待测组分在固定相和流动相中平衡浓度之比值。 容量因子：在一定温度和压力下，待测组分在固定相和流动相中平衡时质量之比值。 色谱术语 --分离度 分离度（R）：相邻两组分保留时间之差与两组分基线宽度总和之半的比值。 R=2(tR2-tR1)/(W1+W2) 一般说当R＜1时，两峰有部分重叠； 当R=1.0时，分离程度98%； 当R=1.5时，分离可达99.7%。 色谱的热力学塔板理论 把色谱柱假想成一个精馏塔，由许多塔板组成，在每个塔板上组分在气液两相间达成一次平衡。经过多次分配平衡后，各组分由于分配系数不同而得以分离，分配系数小的组分，先离开精馏塔（色谱柱）。 塔板数： n = L/H = 5.545 (tR/W1/2)2 = 16 (tR/W)2； n有效= 5.545 (tR’/W1/2)2 = 16 (tR’/W)2 在tR 一定时，如果色谱峰很窄，则说明n越大，H越小，柱效能越高。 L= n 有效H 有效 色谱过程动力学——速率理论 van Deemter方程的数学简化式为 H = A + B / u + C u 式中u为流动相的线速度； A-代表涡流扩散系数 B-分子扩散项系数 C-传质阻力项系数。 色谱定量法 色谱定量公式： 定量校正因子 绝对校正因子： 相对校正因子：用标准物质为参照物、求出待测物质与标准物之间绝对校正因子的比值。对热导池检测器的标准物是苯、对氢火焰离子化检测器的标准物是正庚烷。 定量计算方法 1、归一化法：若样品中所有的组分均能流出色谱柱且有较好的、可分辨的色谱峰时可用此法定量。 2、外标法：所谓外标法就是应用欲测组分的纯物质来制作标准曲线。 此时用欲测组分的纯物质加稀释剂(对液体样品用溶剂稀释、气体样品用载气或空气稀释)配成不同含量(％)标准溶液，取固定量标准溶液进样分析，从所得色谱图上测出响应讯号(峰面积或峰高等)、然后绘制响应信汛号(纵坐标)对百分含量(横坐标）的标准曲线。分析试样时，取和制作标准曲线时同样量的试样(固定量进样)，测得该试样的响应讯号，由标准曲线即可查出其百分含量。 3、内标法：若样品中除待测的几个色谱峰有良好分离，但其它所有的组分不能全部流出色谱柱或有不可分辨的色谱峰时可用此法定量。 3、内标标准曲线法：若样品用量与加入标准物质量完全固定，则内标法的计算就可以简化为内标标准曲线法，它适用于工厂内成批样品的定量分析。 * 色谱分析的基本知识 色谱法的历史 俄国植物学家Michael. S. Tswett将植物色素的石油醚抽提液倒入一根装有碳酸钙微粒的竖直玻璃管中，再加入纯石油醚淋洗，在管中形成不同颜色的色带，抽提液中不同的色素得到分离。 流动相 固定相 色谱法分离分析的原理：利用组分在体系中固定相与流动相的分配有差异，当组分在两相中反复多次进行分配并随流动相向前移动，各组分沿色谱柱运动的速度就不同，在