生物竞赛重难点归纳07核酸的性质及研究方法《生物化学原理（一）》.pptVIP

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2019-12-19 发布于广东
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生物竞赛重难点归纳07核酸的性质及研究方法《生物化学原理（一）》.ppt

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第七章核酸的性质及研究方法;提要;核酸的理化性质;变性;GC含量对DNA Tm的影响;;核酸变性在一定条件下也是可逆的。当各种变性因素不复存在的时候，变性时解开的互补单链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象称为复性。热变性DNA 一般经缓慢冷却后即可复性，此过程被称为退火。伴随着DNA复性的是其浮力密度和紫外吸收的减少、粘度的增加和生物活性的恢复，其中紫外吸收减少的现象被称为减色效应。影响DNA复性的因素有温度、离子强度、DNA浓度和DNA序列的复杂度等。;DNA的复性历程;不同DNA的复性动力学曲线;;不同性质的核酸酶（Pu表示嘌呤，Py表示嘧啶） ;核酸的分离、纯化和定量 ;DNA一级结构的测定;末端终止法;;原理：是用特殊的化学试剂，处理待测的具有末端放射性同位素（32P）标记的单链DNA或者只有一条链的末端被放射性同位素标记的双链DNA片段，造成特定碱基的修饰、脱落和戊糖-磷酸骨架被特异性切割，从而产生一组长度不同的DNA链降解产物，经聚丙烯凝胶电泳分离和放射自显影之后，可直接读出待测DNA片段的核苷酸序列。步骤：进行四组平行的反应 G特异性剪切 ——在碱性条件下，先用硫酸二甲酯（ DMS ）处理，然后再使用哌啶处理。嘌呤碱基特异性剪切——DNA先进行酸处理，然后再加DMS。嘧啶碱基特异性剪切——先用肼处理，然后用哌啶处理。 C特异性剪切——在高盐下，先用肼处理，然后用哌啶处理。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影。比较G、A＋G、C＋T和C各个泳道，自下而上从自显影片上就可读出DNA序列。;化学断裂法测定DNA一级结构的原理 ;焦磷酸测序;深度测序;RNA一级结构的测定