食品中转基因成分检测工作.pptVIP

2 近红外光谱分析法 3 变性高效液相色谱法 基于异源双链DNA与同源双链DNA的解链特性不同，在部分变性条件下异源双链因有错配区的存在而更易变性，在色谱柱中保留时间比同源双链短，故先被洗脱下来，在色谱图中表现为双峰或者多峰的洗脱曲线。 只能鉴定是否存在转基因成分，不能检测转基因具体发生的位置及该区域的基因序列等信息。 基因芯片技术 基因芯片：通过微加工技术 ，将数以万计的特定序列的DNA片段（基因探针）有规律地排列固定于支持物上，构成的一个二维DNA探针阵列，与计算机的电子芯片十分相似，所以被称为基因芯片。 基片：又称载片，是基因芯片中用于固定探针的基质，通常采用标准的载玻片或者其他固体载体，经过化学修饰制备而成。 基因芯片探针：又称寡核苷酸探针，是基因芯片中固定于基质表面、能与样本DNA互补、用于探测样本DNA信息的核酸分子。 杂交：指两条互补的单链核酸形成一条稳定的 双螺旋分子的过程 基因芯片检测原理：探针与待测样品中目标序列按碱基互补原理发生特异性杂交反应，从而实现对目标序列的检测。 基因芯片检测流程 样品 核酸 cDNA文库 DNA列阵 基片 基因芯片 标记的核酸 核酸杂交 洗涤 检测 提取 PCR、 标记 PCR、 纯化 固定 基因芯片技术在转基因食品检验中的应用 检测芯片： ①进行转基因成分筛选； ②转基因食品品系或品种确定； ③转基因重组体构成元件分析。 表达谱芯片 主要应用于转基因食品安全性评估 ，评价转基因食品中外源特异性成分产生了怎样的影响。包括：营养成分、毒性、过敏物质等变化；基 因突变或代谢途径改变；人体内发生 突变而有害人体健康的可能性等。 优点：基因芯片与传统的检测方法相比，灵敏性、特异性高，假阳性、假阴性率低，操作简便快速，高通量。 缺点：成本高 基片材料选择固体类或薄膜类： 普通玻璃片、硅片、聚丙烯膜、尼龙膜等 ①能适应透射光和反射光测量 ②具有惰性和稳定性 ③能使单位载体上结合的分子数达到最大④具有活性基团 基片活化 对载体表面进行化学预处理，使探针固定于介质表面 在基片上结合的活性基团：氨基、巯基、醛基、环氧化物等，与配基结合后形成具有生物特异性的亲和表面，可以固定蛋白质、核酸、多肽等。 杂交信号检测 杂交反应完成后，将基因芯片用激光共聚焦芯片扫描仪进行扫描 激光的激发光源氏荧光生色基团产生高强度的发射荧光，光电倍增管将光信号转换、放大成点信号后收集 通过计算机处理获得数据，统计并分析结果 核酸杂交 将基因芯片与待测样品靶分子两者放置于杂交反应体系中，在一定条件下进行杂交反应，使探针与目标序列按碱基互补配对原则进行特异性结合。 第十二章 食品中转基因成分检验 第一节 概述 转基因生物：利用基因工程技术改变基因组的构成， 用于农业生产或者农产品加工动植物、微生物及产品。主要是转基因植物。 转基因食品： ①：转基因动植物、微生物产品，如转基因大豆 ②：转基因动植物、微生物产品直接加工品，如转基因大豆油 ③：以① 和②为原料生产的食品和添加剂，如转基因大豆油加工成的人造奶油。 转基因成分（外源基因成分）：物种本身不具有的，而是来源于其他物种的功能基因序列。 转基因食品的特征 具有其原有基因表达的性状和功能 存在外源DNA的表达产物及其生物活性 基因重组体 载体：自我复制，运载工具 目的基因：转基因生物性状改变直接相关DNA 调控元件：使目的基因表达精确开始和终止，表达增强 标记基因：进行标记以便筛选转化细胞 报告基因：编码某种易于检测蛋白质或酶的基因 基因组 基因组 启动子 终止子 外源目的基因 基因重组体示意图 外源基因表达的产物主要包括：目的基因、标记基因和报告基因表达的蛋白，或意外表达的蛋白。 使得其具有有传统食物有不同的生物特性，由此产生安全性问题。 第二节 食品中转基因成分检验 检测方法概述 主要针对外源DNA 及其表达产物 DNA分析 蛋白质抗原特性 PCR法 ELISA和 蛋白印迹法 检测流程 采样 混样 样品制备 目标物质提取 PCR或蛋白质检测 结果判断 结果报告 采样要求 1 一般规定：所用器具清洁干燥无DNA和蛋白质污染；避免样品散落，防止污染生态环境；短时间内完成，避免样品组成发生变化 2 抽样方法：随机原则；“三层五点”；若加工工程损坏DNA,则加大采样量 采样要求 3 抽样数量：根据转基因限量水平确定每批中应抽取的原始样品最小数量 4 样品制备与保存：分三份，用于检测，复检和备查；及时加贴标签，注明编号、货物名称、品种、抽样时间、抽样人及其他必要信息 外源基因检测 根据检测目的和检测结果特异性水平不同， 检测方法可分为四类： 初筛试验：普遍存在的基因重组通用元件