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实验8 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 Ⅰ．斐林-酚试剂法 [原 理] 斐林(Folin)-酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应， 其中包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关。在650nm时比色测定的灵敏度比双缩脲法高100倍。由于肤键显色效果增强，从而减少了因蛋白质种类引起的偏差。该法适于微量蛋白的测定(范围为5～l00μg蛋白质)。 [材料、仪器设备及试剂] (一)材料 各种植物材料。 (二)仪器设备 722分光光度计，离心机，恒温水浴，定量加样器，冷凝回流装置一套，研钵，离心管，刻度移液管，微量滴定管，试管等。 (三)试剂 (1)0．5mol／L Na0H。 (2)斐林-酚试剂甲液：由A、B两种溶液组成： A液：4％碳酸钠(Na2C03)溶液与0.2mol/L氢氧化钠(Na0H)溶液等体积混合。 B液：1％硫酸铜(CuS04·5H20)溶液与2％酒石酸钾钠溶液等体积混合。 使用前将A与B按50:1的比例混合即成，此试剂只能在使用当天配制。 (3)斐林-酚试剂乙液：称取钨酸钠(Na2W04。H20)100g，钼酸钠(Na2Mo04·2H20)25g，加蒸馏水700ml溶解于1500mL的圆底烧瓶中。之后加入85％的H3PO4