基因工程制药新版3.pptxVIP

第三节 基因工程制药生产的基本过程;三、外源DNA和目的基因的分离和获得;（一）基本操作方法;1、操作条件;2、提取方法;3、分离方法;4、纯化方法;（二）不同类别DNA的提取技术;1、质粒DNA的提取;2、细菌染色体DNA的提取;3、真核生物DNA的提取;4、病毒DNA的提取;（三）目的基因的制备;;;1、物理分离法;（1）分离方法;物理学密度梯度离心法;凝胶电泳分离技术;（2）物理分离法实例;2、化学合成法;（1）化学合成法的概念和分类;;（2）化学合成法的优缺点;（3）化学合成法的实例;3、逆转录法;（1）逆转录法的理由;（2）???转录法的理论依据;（3）逆转录所产生的DNA的特性;（4）逆转录法的具体步骤;A、mRNA的纯化; mRNA的分离;B、cDNA第一链的合成;C、cDNA第二链的合成;mRNA;D、cDNA的克隆和重组;（D1）、用于cDNA的克隆的载体;（D2）、cDNA的片段与载体的连接;E、将重组体导入宿主细胞;F、cDNA文库的鉴定;G、目的cDNA克隆的分离和鉴定;（2）特异亲合鉴定法----对于那些表达水平低,不能纯化得到足量蛋白质的进行序列测定,利用一种能与靶蛋白特异结合的配体,从已构建的表达型重组文库中筛选该蛋白的基因。 ①已知的可在体内与靶蛋白相互作用的蛋白/小分子化合物 ②抗靶蛋白抗原决定簇的IgG ③可被靶蛋白识别的