实验八 凝胶过滤法分离蛋白质.pptxVIP

一．目的要求： 学习和掌握凝胶过滤层析分离蛋白质的原理与方法。;二．原理分子筛层析molecular-sieve chromatography凝胶过滤层析gel-filtration chromatography分子排阻层析molecular exclusion chromatography;凝胶过滤介质;交联葡聚糖凝胶（Sephadex）;;G值越小，交联度越大，网孔越小，吸水膨胀越小，只能分离相对分子量小的物质； G值越大，交联度越小，网孔越大，吸水膨胀越大，可以分离相对分子量大的物质；;凝胶过滤层析特点;除盐;洗脱时，大分子受阻小最先流出，小分子受阻大而最后流出，结果使大小不同的物质分离。用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐，所用的时间就比较短。 用于分离及测定样品分子量：标准分子量样品，logMW对洗脱体积作图 ;三、器材与试剂;四、实验操作;实验操作;3、加样： 取4mg/ml 蓝色葡聚糖溶液、6mg/ml细胞色素C溶液、2mg/ml重铬酸钾溶液各6滴混合--------上柱样品。 打开下端出口，使表面的蒸馏水流出，直至恰好与表面相平（不可使床面干掉），关闭下端出口，用滴管将上述样品缓缓地加到床表面( 不要使平整的床表面搅动)。 打开下端出口，让样品进入床内，直至样品全部进凝胶柱，关闭下端出口。 滴加蒸馏水使凝胶柱上端有2cm水柱 。