乳粉中蛋白质含量的测定.docVIP

《食品营养与检测》综合技能实训指导书 实训项目名称 乳粉中蛋白质含量的测定 学时 4学时 实训目的 1.通过本实验掌握乳粉中蛋白质含量的测定方法 2.通过实验了解乳粉中蛋白质含量测定的原理及操作要点 一、实验原理 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。 二、仪器和用具：微量定氮蒸馏装置 1、电炉； 2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）；3、螺旋夹a；4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；5、反应室；6、反应室外层；7、橡皮管及螺旋夹b；8、冷凝管；9、蒸馏液接收瓶。 三、实验步骤 1、样品消化 称取乳粉约1g（精确到0.0001g），移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和3g硫酸钾，加入20mL浓硫酸，置于消化炉（在通风橱中450℃）上消化约3h，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。 试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。 定氮装置的检查与洗涤 检查微量定氮装置是否装好。在蒸气发生瓶内装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。 测定前定氮装置如下法洗涤2～3次：从样品进口入加水适量（约占反应管三分之一体积）通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子a，使反应管中的废液倒吸流到反应室外层，打开夹子b由橡皮管排出，如此数次，即可使用。 碱化蒸馏 量取硼酸试剂20mL于三角瓶中，加入混合指示剂2～3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夹a关闭，螺旋夹b开启的状态下，准确吸取10.0mL样品消化液，由小漏斗流入反应室，并以10mL蒸馏水洗涤进样口流入反应室，棒状玻塞塞紧。 将10mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，用少量水冲洗立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气，开启螺旋夹a，关闭螺旋夹b，开始蒸馏。通入蒸汽蒸腾10min后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，准备滴定。 同时吸取10.0mL试剂空白消化液按上法蒸馏操作。 4、样品滴定：以0.05mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点 5、数据处理 平行测定两次取平均（样品两次，空白两次）结果保留三位有效数字 重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对不得超过算术平均值的10%，即 注意事项 1、半固体试样一般取样范围为2.00g～5.00g；液体样品取样10.0mL ～ 25.0mL（约相当氮30mg～40mg）。若检测液体样品，结果以g/100mL表示。 2、消化时，若样品含糖高或含脂及较多时，注意控制加热温度，以免大量泡沫喷出凯氏烧瓶，造成样品损失。可加入少量辛醇或液体石蜡，或硅消泡剂减少泡沫产生。 3、消化时应注意旋转凯氏烧瓶，将附在瓶壁上的碳粒冲下，对样品彻底消化。若样品不易消化至澄清透明，可将凯氏烧瓶中溶液冷却，加入数滴过氧化氢后，再继续加热消化至完全。 4、硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则氨吸收减弱，造成检测结果偏低。可把接收瓶置于冷水浴中。