《第九章蛋白质的研究历史与方法》-公开课件.pptVIP

细胞内有许多种还原成分，一旦细胞破碎 由于和氧的接触以及稀释作用而使抗氧化 成分减少，导致许多蛋白质被氧化而失去活 性，如巯基蛋白 常用的还原剂 抗坏血酸 巯基乙醇(mercaptoethanol) 二硫苏糖醇(dithiothreitol, DTT) 蛋白质的环境因素 表面效应 温度 储存 四、离心去除细胞碎片 五、目标蛋白的纯化 1. 盐析 (salting out) 2. 离子交换层析 3. 凝胶过滤层析 4. 亲和层析 第三节 蛋白质的检测和鉴定 光谱学特性 190～200 nm 230～300 nm 电泳检测 SDSIEF 分子量测定 排阻层析 沉降平衡超速离心 动态弹性光散射 孔径梯度电泳 质谱 氨基酸序列测定 用抗体检测蛋白质 Western blotting 免疫共沉淀 — 一般了解 一类是测定溶液中蛋白质分子的结构 如核磁共振 (NMR)、圆二色谱法、激光拉曼光谱法、荧光光谱法、紫外差光谱法以及氢同位素交换法 另一类是测定晶体蛋白质的分子结构 如X射线衍射分析法、小角中子衍射法 第四节 蛋白质空间结构分析 谢谢！ 基因 (gene) 基因组(genome) 基因组学(genomics) 蛋白质(protein) 蛋白质组(proteome) 蛋白质组学(proteomics) 第 九 章 蛋白质的研究历史与方法 第一节 蛋白质研究的历史回顾 蛋白质是一类重要的生物大分子，protein字源出自希腊文，是“最原初的”，“第一重要的” 意思 19世纪30年代中期以前，认识其化学元素组成情况及原子之间结合比例，即确定经验性的分子式 1937年，A. W. k. Tiselius 建立了研究蛋白质的移动界面电泳(electrophoresis )方法, 于1948年获诺贝尔化学奖 1941年，A. J. P. Martin和R. L. M. Synge建立了分配层析(partition chromatography)技术，被授予1952年的诺贝尔化学奖 The Nobel Prize in Chemistry 1948 for his research on electrophoresis and adsorption analysis, especially for his discoveries concerning the complex nature of the serum proteins Arne W. K. Tiselius Uppsala University Uppsala, Sweden 1902 - 1971 The Nobel Prize in Chemistry 1952 for their invention of partition chromatography Archer J. P. Martin Richard L. M. Synge 1/2 of the prize 1/2 of the prize National Institute for Medical Research London, United Kingdom Rowett Research Institute Bucksburn (Scotland), United Kingdom 1910 - 2002 1914 - 1994 1953年，F. Sanger利用纸层析和纸电泳技术第一次揭示出牛胰岛素的一级结构，开创了以后数千种蛋白质序列分析的先声，被授予1958年的诺贝尔化学奖 The Nobel Prize in Chemistry 1958 for his work on the structure of proteins, especially that of insulin Frederick Sanger University of Cambridge Cambridge, United Kingdom 1918 - The Nobel Prize in Chemistry 1980 for his fundamental studies of the biochemistry of nucleic acids, with particular regard to recombinant-DNA for their contributions concerning the dete