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生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, February 25; 24(2): 226-231
journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
研究报告
F48E9 HN DNA
1, 2 1 1 1 2 1
贺 笋 , 石星明 , 王云峰 , 王 玫 , 冉多良 , 童光志
1 , 150001
2 , 830052
: DNA 疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系, 为了提高目的基因的表达量, 本研究对
NDV F48E9 株的 HN 基因进行了修饰, 对修饰前后 HN 基因表达水平进行了比较。利用分子生物学软件将 NDV F48E9 株
的 HN 基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子, 同时在 HN 基因的 5 端加上同样已替换密码子的禽流感病毒 HA
蛋白信号肽序列以期望提高目的蛋白在细胞中的表达。修饰后 HN 基因命名为 SoptiHN, 剔除信号肽的 HN 基因命名为
optiHN 。将 SoptiHN、optiHN 和 F48E9 株的 HN 基因分别克隆到真核表达载体 pVAX1 和含有多个鸡体内最适免疫刺激
序列 CpG-ODN 的载体 pVAX1-CpG 中, 将他们分别命名为 pV-SoptiHN 、pVC-SoptiHN 、pV-optiHN 、pVC-optiHN 和
pV-HN 、 pVC-HN, 用这些质粒转染 293T 细胞, 48 小时后间接免疫荧光和 Western blotting 检测细胞中瞬时表达的 HN
蛋白。结果显示, 与未经修饰的 HN 基因相比, 修饰后的 HN 基因体外瞬时表达水平明显提高, 并且密码子优化与添加
信号肽序列这两种途径都可以提高 HN 基因的体外表达量.
: NDV, DNA 疫苗, 密码子优化, 信号肽, 间接免疫荧光, 免疫印迹
Effect of Modified NDV F48E9 Strain HN Gene and in vitro
Expression of Its DNA Vaccine
1, 2 1 1 1 2 1
Sun He , Xingming Shi , Yunfeng Wang , Mei Wang , Duoliang Ran , and Guangzhi To
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