第三节激光扫描共聚焦显微镜.pptVIP

主要内容 1、分子荧光的形成 2、微生物研究中常用的荧光染料 3、共聚焦显微镜基本原理 4、共聚焦显微镜在微生物研究中的应用 一、分子荧光的产生 1.1 分子荧光产生的条件 1. 基态分子受到能量激发，吸收一定能量后，跃迁至激发态, 通常为π→π*、n→π*跃迁 2. 激发态分子在很短时间内，以电磁辐射的形式释放能量并返回基态，便产生了分子发光（荧光或磷光） 1.2 影响荧光的因素 1. 溶剂的影响 除一般溶剂效应外，溶剂的极性、氢键、配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化 2. 温度的影响 荧光强度对温度变化敏感，温度增加，外转换去活的几率增加 3. 溶液pH 对酸碱化合物，溶液pH的影响较大，需要严格控制 二、微生物研究中常用的荧光探针 荧光探针主要基于测定微生物的某一生理进行分类 1、膜通透性（membrane integrity） 2、代谢活性(metabolic activity) 3、膜电位(membrane potential) 4、酯酶活性(esterase activity) 5、pH 梯度(pH gradient) 6、其它 1、膜通透性(membrane integrity) BacLight Live/Dead (PI/SYTO9) 2、代谢活性(metabolic acti