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染色步骤 PI (Propidium Iodide 碘化丙啶 ) 染色 : 是一种可对 DNA染色的细胞核染色 试剂， 常用于细 胞凋亡检测 . 碘化丙啶 （Propidium Iodide, PI ）是一种核酸染料 (红 色），它不能透过完整的细胞膜， 但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通 透性的增加， PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红 .用 PI 单一染色观测培养细胞， 只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡 PI 亦可着色）。但是如 果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么 PI 单一染 色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么 PI 单一染色显然不够！ annexin-v 染色 细胞凋亡早期 ,细胞膜标志发生改变 .其中 ,磷脂酰丝氨酸 (Annexin-V,PS) 外翻 ,Annexin-V 在 Ca+ 存在的条件下与其高亲和力特异性结合 . 这样 ,Annexin-v 染色阳性 ,表示细胞处于早期凋亡状态 .Annexin-V 结合不同的荧 光抗体 ,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细 胞凋亡的发生。 Annexin V 用 FITC 标记发绿色荧光；如果用 PE标记就发红色荧 光。 JC-1 染色 JC-1 是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体 (monomer)存在，发射光以绿光 (～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体 (aggregation)，发射光以红光 (-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性 2+ + + (polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由 Ca 、Na 和 H 流调控。 当线粒体状态良好时对 JC-l 摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在 绿光强度 /红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化 (depolarization)时，线粒内 JC-l 的浓度较高， 多以多聚体的形式存在， 绿光强度 /红光强度的比值降低。 JC-1 染色的绿光强度 /红光强度仅取决于线粒体的膜电势 (membrane potential)，而与线 粒体的形态、 体积和密度都无关， 因而能更好地反映线粒体的功能状态。 由于凋 亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此， JC-1 染色被用于检测凋亡的早期发 生。其实验方法如下。 JC-l 染色非常简单。 首先可将成品 JC-1 以 DMSO 配成储存液 (1～5mg/ml) ，储存 于-20℃，用时以培养液稀释至 10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养 液，漂洗细胞后直接加入染色液， 10-30min 后在荧光显微镜下或者激光共聚焦 下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙 色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红 /绿 信号强度，计算其强度比。 钙黄绿素 -AM(Calcein-AM): Calcein -AM 本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用， Calcein -AM 能脱去 AM基，产生的 Calcein 能发出强绿色荧光（激发： 490 nm，发射： 515 nm）。 因此 Calcein -AM 仅对活细胞染色 细胞活力鉴定——台盼蓝染色法 原理： 细