血球计数板的使用.docVIP

血球计数板的使用 姓名原理 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。 计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由 16×25=25×16=400个小方格组成。每一个大方格边长为1 mm，则每一个大方格的面积为1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1 mm3 血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例)： 1 样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。 2 将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。 3 将稀释后的酵母菌悬液用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入。多余的菌液用吸水纸吸取。稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。 4 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 5 当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。 6 对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。 计算公式： (1) 16格×25格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数 (2) 25格x16格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10×稀释倍数 7血球计数板的清洁： 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷。洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止 4 例题: (2012年江苏27).蓝藻、绿藻和硅藻是湖泊中常见藻类。某课题组研究了不同pH对3种藻类的生长及光合作用的影响，实验结果见图1、图2，请回答下列问题： （1）根据图1和图2分析，3种藻类中pH适应范围最广的是 ，在pH为8.0时，3种藻类中利用CO2能力最强的是 。 （2）在培养液中需加入缓冲剂以稳定pH，其原因是 。 （3）在实验中需每天定时对藻细胞进行取样计数，请回答下列问题： ①取出的样液中需立即加入固定液，其目的是 。 ②在计数前通常需要将样液稀释，这是因为 。 ③将样液稀释100倍，采用血球计数板(规格为1mm×1mm×0.1mm)计数，观察到的计数室中细胞分布图见图3，则培养液中藻细胞的密度 是 个/mL。 【答案】（1）绿藻 蓝藻（2）藻类生长代谢会改变培养液pH（3）①维持藻细胞数目不变 ②藻细胞密度过大 ③1×108 【解析】（1）由图1、图2可知，pH改变后绿藻的生长速率和光合速率变化不大，其次是蓝藻。由图2在pH为8.0时，蓝藻的光合速率最大，利用CO2能力最强。（2）藻类植物在光合作用时大量吸收CO2，代谢过程产生一些物质会 改变培养液的pH。 （3）①取样后向样液中加入固定液来杀死细胞，维持藻类细胞数目不变；②由于样液藻类细胞的密度比较高，稀释后方便计数；③血球计数板规格为1mm×1mm×0.1mm，采用五点取样法，取四角和最中间的5个中方格计数，采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，平均每个中方格内有4个酵母菌。计数区有25个中方格，共计有酵母菌4×25=100个。 (上图中的五个红色方格） 计数区体积为1mm×1mm×0.1mm =0.1mm3=0.1×10-3 mL，换算成1mL，则有酵母菌100×104个，再乘以稀释倍数100，结果为108个。