利用细胞工程技术筛选小麦抗根腐病突.pdfVIP

遗 传学 报， 18(6):500501,1991 ActaCeneticaSinica 利用细胞工程技术筛选小麦抗根腐病突 变体的研究＊ 郭丽娟 姚庆筱 胡启德 （中国科学院遗传研究所，北京 100101) 康绍兰 董金皋 张 汀 黄梧芳 、（河北农业大学，保定） 以小麦根腐病菌002号菌株产生的致病培养滤液为选择剂，选用春、冬小麦品种、品系 以及杂种的花药和幼德进行离体培养，并结合物理诱变技术，已获得抗根腐病的植株，用根腐 病前分生抱子接种鉴定，再生植株50株中有 12株抗病。 笑键词 小麦根腐病菌抗病突变体，离体筛选 小麦根腐病 (Helminthosporiztmsatiuatm）是我国北方春、冬小麦区的主要病害之 一，近年来危害面积不断扩大，有逐渐向南方冬麦区蔓延的趋势，严重地影响小麦产量的 提高。由于育种上缺乏坑源，所以通过常规育种，至今尚未选出过硬的抗病品种，以满足 生产上的需要。如用远缘杂交须经过长期的杂交选育，因需一再和小麦回交常使获得的 杂种后代抗病性减弱乃至丧失。 自从70年代初 Carlson181首先成功地获得了烟草抗野火病突变体以来，许多科学工 作者又相继在玉米1107、马铃薯，〔、‘油菜 ，〔一‘，、甘蔗1121r首着L6,111r燕麦1141、水稻(1,3)、大麦和小麦，，〔 等作物筛选抗病突变体获得成功。 本文报道中国科学院遗传研究所与河北农业大学合作于 1987--1989年利用组织培 养结合物理诱变技术，以小麦根腐病菌培养滤液为选择剂，筛选小麦抗根腐病的突变体并 建立筛选和抗病鉴定体系的研究结果。 材 料 和 方 法 一（）试验材料 选用7个对小麦根腐病中抗和中感的春、冬小麦品种、品系和杂种的花药和幼穗为接 种材料。 二（）根腐病致病培养滤液的制备和离体根冠细胞测定方法 从小麦根腐病发病严重地区收集的30个菌株中，用生物学测定法，选出了产生毒力强 而稳定的根腐病菌002号菌株，将这个菌株的菌体放在改良Fries加麦汁的液体培养基 中振荡培养，巧天后将培养滤液消毒和浓缩后备用。 本文于 1990年2月20日收到。 冷本项研究得到国家自然科学基金的资助。赵四维同志参加本项工作在此致谢。 6期 郭丽娟等：利用细胞工程技术筛选小麦伉根腐病突变体的研究 501 根冠细胞测定法：取萌发后根长约1015mm的小麦种子苗，置含有IOmlpH6 7的不同滚度培养滤液的锥形瓶内振荡10分钟取出上清液移人试管内，6小时后滴4--5 滴0.05务中性红液染色2-3分钟，然后置显微镜下观察，活细胞成红色；死细胞不着色。 三（）培养墓 诱导愈伤组织的培养基：花药用q，培养基、幼穗用MS培养基为基本培养基；分 化培养基；花药用 190-2培养基，幼穗用 MS培养基为基本培养基；壮苗培养基：均用 大量元素减半的MS培养基；选择培养基：．是在上述3种培养基上按每1000ml中分别 加人1克、2克、3克以及5克浓缩的小麦根腐病菌培养滤液制成的。 （四）Y一射线诱变处理 在花药、幼穗诱导出愈伤组织后，将接种的三角瓶放置在剂量率为10ORad／分钻源 下，使愈伤组织经受150ORad．的r-射线照射，均以未经照射的愈伤组织为对照，处理后 将愈伤组织转到选择培养基上进行筛选。 五（）再生植株的抗病鉴定 对再生植株进行根腐病菌分生抱子喷雾定量接种，抱子悬浮液浓度为平均 10个抱 子／视野，．接种后放置在250C;温室中保湿两天，10天后调查病情，分感’1与和抗病二级。 试 验 结 果 一（）小麦根腐病菌培养滤液的致病作用 将从根腐病002号菌株制备的培养滤液，用针刺法接种于小麦幼苗的叶片上，3夭后 在叶片上出现了典型的小麦根腐病枯死病斑，而用无菌水处理的对照叶片上则无病斑。以 上结果表明，用根腐病菌的培养滤液和