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BCA Protein Assay Kit BCA 蛋白质定量试剂盒 【货号】E162-01 【产品概述】 BCA （Bicinchoninic Acid）蛋白浓度检测法是目前常用的蛋白质定量方法之一。BCA测定方法的原理与Lowry法相似，利用 2+ + + Cu 在碱性条件下，可以被蛋白质还原成Cu ，Cu 与BCA试剂结合形成紫色的络合物的特性，通过测定样品在 562 nm波长 下的吸光值，并同蛋白标准曲线对比，即可计算出待测样品的蛋白浓度。BCA法与Lowry法相比，操作更为简便，稳定性更好。 该方法还具有反应产物稳定、灵敏度高、线性范围广、对不同种类蛋白质检测的变异系数小、对去垢剂耐受性好等特点，特 别适合于微量测定。 【产品组分及保存条件】 成分 体积 保存条件 BCA Reagent A 100 ml (约100次标准法) 4 ℃或室温保存一年 BCA Reagent B 3 ml 4 ℃或室温保存一年 BSA 标准品 (2 mg/ml) 1 ml -20℃保存一年 【使用方法】 1. 制备BCA工作液：根据标准品和待测样品的数量，将适量Reagent A和Reagent B按50:1 比例混合。混合过程中液体可能 出现浑浊，充分混匀后则形成清亮浅绿色溶液。BCA工作液室温24小时内稳定。 2. 配制BSA标准品反应溶液：将BSA标准品用去离子水稀释成不同浓度，以制作标准曲线；浓度范围可设定在25~2500 μg/ml，或涵盖样品估计浓度的一定范围。用去离子水作空白对照。 3. 样品准备：待测样品若浓度过高，可用去离子水制备2~3个稀释浓度。 4. 标准法：(线性范围：20~2500 μg/ml；反应总体积：1.1 ml) 1) 分别取100 μl各个待测样品、步骤[2]中所配制的BSA标准品稀释液和空白对照，与1 ml BCA蛋白质染剂均匀混合， 加入比色杯中； 2) 37℃放置30分钟后，自然冷却至室温； 3) 使用分光光度计测定562 nm波长（或540~590 nm波长）下的吸光值；所有样品应在10分钟之内读完； 4) 根据蛋白标准品浓度和吸光值，制作蛋白浓度标准曲线； 5) 根据蛋白浓度标准曲线和样品稀释倍数计算样品的蛋白浓度。 5. 微量法：(线性范围：20~2500 μg/ml；反应总体积：220 ul) 1) 96孔板各孔中加入20 μl不同浓度的BSA标准品、待测样品和空白对照； 2) 向各孔中加入200 μl BCA工作液，均匀混合； 3) 37℃放置30分钟后，自然冷却至室温； 4) 使用酶标仪测定562 nm波长（或540~590 nm波长）下的吸光值；所有样品应在10分钟之内读完； 5) 根据蛋白标准品浓度和吸光值，制作蛋白浓度标准曲线； 6) 根据蛋白浓度标准曲线和样品稀释倍数计算样品的蛋白浓度。 【补充说明】 1. BCA蛋白浓度测定的显色反应依赖于Cu2+离子的还原。还原剂如DTT、巯基乙醇，以及离子络合剂如EDTA、EGTA，均 可干扰呈色反应。因此当样品中上述物质含量较高时，应选择使用Bradford蛋白质定量试剂（货号E161-01）或采用稀释、 透析、TCA沉淀等方法去除上述干扰物质。 2. 反应温度和时间也可根据实验需要作如下调整： a. 室温反应：25℃放置2小时 (线性范围：20~2500 μg/ml) b. 增强反应：60℃水浴放置30分钟 (线性范围：5~250 μg/ml) 注：反应时间越长或反应温度越高，A260nm测量值越高，但会导致检测灵敏度降低、线性范围缩小。 3. 使用培养箱温育时，应避免将比色杯或96孔板放置在温箱底部和风扇附近，以防因加热不均而导致的显色差异。 北京康润诚业生物科技有限公司 GenStar BioSolutions Co., Ltd. 北京市昌平区生命园路 29 号创新大