RNAi和siRNA转染-新版.pptxVIP

RNAi和siRNA转染;内 容;第一部分RNAi实验基本概念;主要内容;1.RNAi的概念;2006年度诺贝尔生理学或医学奖共同授予安德鲁·菲尔和克雷格·梅洛，他们发现了“RNA干扰机制—双链RNA沉默基因”。;2.RNAi的启动途径;(1) dsRNA途径;(2) siRNA途径;(3) shRNA表达载体途径;3.非哺乳动物系统的RNAi实验;4.哺乳动物系统的RNAi实验;5.RNAi效应表现;第二部分哺乳动物系统的RNAi实验设计;主要内容;1.需要短期抑制还是长效抑制?;2. 采用siRNA进行实验的途径;3.构建shRNA表达载体进行实验;4.siRNA设计需要注意的问题;(1) siRNA的设计;(2) 阴性对照siRNA的作用;(3) 阳性对照siRNA的重要性;(4) siRNA荧光标记的问题;5.RNAi Off-target(脱靶效应);(1) RNAi Off-target(脱靶效应)是什么？;(2) 脱靶效应如何检测？;(3) siRNA浓度是否和脱靶效应相关？;(4) 转染试剂是否也会造成脱靶效应？;(5) 如何避免脱靶效应？;6.转染是RNAi实验的瓶颈;(1) 选择转染方法的原则;(2) siRNA转染的方法;(3) siRNA转染试剂的主要种类;(4) 脂质体;(5) 非脂质体聚合物类;第三部分siRNA转染过程相关问题及解答;1.siRNA转染过程相关问题;(1) 转染细胞数量的问题;(2) 转染时siRNA工作浓度;(3) 转染时血清的问题;(4) 转染时抗生素的问题;(5) 转染过程;(6) 转染后换液的问题;(7) 转染条件优化的问题;(8) RNAi效应检测方法;2.siRNA转染疑问解答