《Aptamer技术在食品安全监测领域中的应用》.pptVIP

Aptamer技术在食品监测领域中的应用;第一节 Aptamer技术的基本原理 一、Aptamer技术的发展历程 二、Aptamer技术的基本概念 二、Aptamer技术的原理;第三节 Aptamer技术在食品安全监测领域的应用 一、检测金属离子　 二、检测有机小分子 三、检测抗生素 四、检测真菌毒素 五、检测其他非法添加物; 第一节 Aptamer技术的基本原理;?????; 90年代，人们用不同分子作为target筛选了和它们特异性结合的RNA分子，并开始命名其为aptamer。 Papers in《Science》and 《Nature》: 1 Tuerk C,Gold L.1990.Systemic evolution of ligands by exponential enrichment:RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.Science 249:505-10; 2 Ellington AD,Szostak JW.1990.In vitro of RNA molecules that bind specific ligands.Nature 346:818-22 开始于生物化学，得宠于化学生物学 ; ;三、Aptamer技术的原理 核酸分子之间可以通过碱基配对而特异性结合；但不限于此，核酸分子亦可形成多种稳定的次级结构，如茎环、发夹、假结、凸环、口袋等，与靶分子形成空间互补，通过静电作用、范德华力以及氢键等分子间作用力，而与靶分子紧密和特异性结合。; ;一、核酸适配体的制备;SELEX（指数级富集配体系统进化）技术： 基本流程如下: ;图1:SELEX筛选循环过程示意图; 核酸适配体被比喻为“化学抗体”，但相比于传统的抗体又具有很多独特的优点，例如: a.靶分子范围非常广泛：从金属离子到有机小分子、氨基酸、蛋白质、甚至细胞。 b.筛选过程不依赖于生物体：并且适配体的筛选过程无需在生理条件下进行，可以筛选出没有免疫原性或低免疫原性，甚至具有毒性的靶物质的核酸适配体。 ;c.除此之外，可以通过体外人工合成，获得成本低廉、高纯度、具有好的化学稳定性和热稳定性的核酸适配体。 d.并且这些核酸适配体的末端易于修饰上各种活性基团如:氨基、磷酸基、琉基、荧光标记物、电化学标记物等，用于表面固定修饰或者检测。;三、其他优点; 第三节 Aptamer技术在食品安全监测领域的应用;图2：Aptamer的筛选与应用;法一：某科学家筛选出一种核酸适配体通过构型转换形成特定的二级结构用于绑定地下水中三价砷和五价砷。 结合常???分别可达7nmo1/L和5nmol/L。 （灵敏度高） 法二：通过核酸适配体和金纳米粒子利用比色法实现对三价砷离子的快速检验。针对三价砷的核酸适配体在三价砷离子存在的情况下与砷离子结合呈现蓝色，而带有正电荷的PDDA会导致带负电荷的金纳米粒子的聚集，从而颜色由红变蓝实现比色法测定。 （方便、快捷）;图3：Aptamer用于As3+检验; 汞离子的危害：是一种高毒性并分布广泛的污染物，在鱼类及贝类中常常以甲基汞的形式存在。汞通过食物摄入后对人体的危害主要累及中枢神经系统、消化系统及肾脏，此外对呼吸系统、皮肤、血液及眼睛也有一定的影响。 利用核酸适配体与铅和汞分别形成G-quartet结构和发卡结构的构型实现了对铅和汞的同时测定(见图4)。现已开发了一种表面增强拉曼光谱微滴传感器，利用核酸适配体修饰的纳米粒子实现了对汞离子的高灵敏快速检测。 检测限可达10pmol/L. ;图4：核酸适配体同时检测Hg2+和Pb2+示意图; 双酚A是己知的内分泌干扰素，可以发挥雌激素的作用扰乱人体内的代谢过程。2010年，加拿大成为首个将之列为有毒物质的国家。在欧盟和加拿大，双酚A被禁止用于生产婴儿奶瓶。;双酚A检测过程如下：;检测双酚A的另一种方法： ; 三聚氰胺是一种以尿素为原料生产的氮杂环有机化合物，常温下为白色单斜晶体，没有显著异味。目前主要用于木材加工、涂料、造纸等工业生产过程，但有些不法商贩将其添加到奶粉中提高“氮含量”，引发了严重的食品安全事件。因此，研究一种方便、快捷、高效的检测方法尤为重要。;图6：基于Aptamer修饰的银纳米粒子利用光散射检测三聚氰胺; 可卡因增加耐药性和药物依赖，从而导致滥用。Takeuchi小组利用可卡因Aptamer与客体间的特异性结合，制备了可卡因快速检测芯片，其原理类似于对双酚A的比色法检测。;三、检测抗生素; 真菌毒素是真菌在食