毕业论文·设计《酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究》.docVIP

课外学术科技作品竞赛 论 文 作品名称： 酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究 摘 要 目的:对酒精对小白鼠肝脏的损伤及其可能的影响机理进行研究.方法:用体重为18-22g的小白鼠40只,随机分为四组第，1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌，每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次持，续5wk。每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态， 同时测量小白鼠的血清ALT、AST的含量。5wk后，处死小白鼠，取每只小白鼠相同部位的肝脏，观察其形态。结果:(1)各组小鼠平均体重均有增加，第1组增加最多，第3组增加最少;(2) 第1，4组小白鼠食欲正常，精神状态好，第2，3组小白鼠有醉酒现象;(3)光镜下实验动物肝脏脂肪沉积，肝细胞病理损伤及肝组织炎症反应程度加重，纤维化不明显;(4) ALT，AST水平升高。结论:酒精可以导致肝细胞物质代谢障碍，使肝细胞变性，坏死。 关键词:酒精 灌胃 肝细胞病理损伤 肝细胞变性 实验材料 1.1 药物与试剂 NaH2PO4 .2H2O 24g ，Na2HPO4 .12H2O 240g ，丙酮酸钠 176mg, α—酮戊二酸 240mg，DL—丙氨酸8mg，2,4—二硝基苯肼160mg，NaOH，纯盐酸，DL—门冬氨酸12mg，酒精。 1.2仪器 分光光度计，烧杯，100ml容量瓶2个，1000ml容量瓶2个水浴锅，量筒，冰箱。 1.3 动物 40只体重为18-22g的wister小白鼠 2. 实验 2.1 取材 从南华生命科学院购买小白鼠40只 2.2 酒精灌胃处理 将40只体重为18-20g的小白鼠,随机分为四组，将四组小白鼠先适应性地喂养1wk，随后将第1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌胃, 每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次，持续5wk。 2.3 测体重及记录精神状态 每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态。 2.4 赖氏法检测小鼠血清ALT，AST含量 2.4.1 ALT含量测定 2.4.1.1试剂配制 1）0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4） 称取NaH2PO4 .2H2O 2.96495g ，Na2HPO4 .12H2O 29.0142g ，溶解，定容到1000ml。 2） 20umol/L 丙酮酸钠标准液 称取22mg丙酮酸钠溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）100ml中，现配先用。 3）ALT基质液 称取α—酮戊二酸29.2mg，DL—丙氨酸1.78mg溶解于30ml 0.1mol/L磷酸缓冲液中（PH7.4），溶解后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸缓冲液定容至100ml。置冰箱中保存备用（可保存一周）。 4）0.02% 2,4—二硝基苯肼溶液 称取20mg 2,4—二硝基苯肼先溶解于10ml纯盐酸中，电炉加热助溶，待全部溶解后，稀释至100ml，过滤后盛于棕色瓶中，置冰箱中备用。 5）1mol/L NaOH溶液 称取4g NaOH溶解于蒸馏瓶后，定容到100ml。 6）0.4 mol/L NaOH溶液 称取16g NaOH溶解，定容到1000ml。 2.4.1.2 实验方法 1） ALT曲线的制作 （1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温37℃然后使用，取6支试管按表1进行配制。 表1 ALT标准曲线的制作 ? 管号 试剂（ml） 0 1 2 3 4 5 20umol/L 丙酮 酸钠标准液 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 ALT基质液 ? 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.1mol/L磷酸缓冲液 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 混匀，将各管置37℃水浴中保温60min 2,4—二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，将各管置37℃水浴中保温20min 0.4 mol/L NaOH溶液 ? 5 5 5 5 5 5 混匀，将各管置37℃水浴中保温10min （2）冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。 （3）以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线。 2）小鼠肝组织ALT含量的测定 （1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温至然后使用，取2支试管按表2进行配制。 表2 ALT含量测定 管号 试剂（ml） 0 1 样品 0.10 0.10 ALT基质液 —— 0.50 混匀，将各管置37℃水浴中保温60min ALT基质液