噬菌体质粒m13可以产生单链.pptxVIP

;? DNA;;;可以插入超过10 Kb的外源DNA。该载体携带的lacZ’基因上有一个多克隆位点接头，外源基因插入到多接头上6个酶切位点中的任何一个，都会使该基因失活，从而使得噬菌斑是无色清澈的而不是蓝色的。 ;Spi 重组子的筛选 ;3.5 基于M13噬菌体的载体; 3.5.1 M13——纤维状噬菌体;;;在宿主细胞内，单链DNA分子作为模板生成一条互补链，形成正常的双链DNA分子（replication form, RF）。这个双链DNA分子不会插入细菌基因组，但会持续复制直到细菌中的拷贝数超过100。当细菌分裂时，每个子细胞都能得到一个或多个噬菌体基因组的拷贝，这些拷贝也能继续复制，以保证每个细胞具有恒定的拷贝数。;;◆M13的侵染循环;一个正常的M13噬菌体的基因组是6.4 Kb，紧密排列着10个基因，每一个基因对噬菌体的复制都是必须的。基因间有一长为507 bp的短序列，外源DNA片段必须从这里插入才不会损伤其他的基因，同时还必须保证该序列中的复制起点不被破坏。显然，只有一个很小的空间可用于改造M13噬菌体。 ; ;3.5.2 M13mp2克隆载体的开发;M13mp1的lacZ’基因上不含有任何限制性酶切位点，但在靠近基因起始位置的地方有一个GGATTC的序列。改变一个核苷酸就变成了GAATTC，这是EcoR I的识别位点。M13mp2的lacZ’基因的第6个