实验凝胶过滤法使蛋白质脱盐.pptxVIP

实验三 凝胶过滤法使蛋白质脱盐;【实验原理】 凝胶层析又称分子筛层析、排阻层析或凝胶过滤，是以凝胶为载体，根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的相对分子质量进行分离和纯化。 该方法广泛用于生物大分子的分离、纯化、浓缩等。; 凝胶是一类具有多孔立体网状结构的不溶性珠状颗粒。多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，用它来进行物质分离，主要是根据多孔凝胶对不同相对分子质量的物质具有不同的排阻效应实现的。; 葡聚糖凝胶的商品名称为Sephadex，它具有三维空间的多孔网状结构，呈珠状颗粒。 ;;凝胶过滤层析过程示意图;;【实验操作】 （一）凝胶的溶胀 取Sephadex G－25， 加入去离子水置室温溶胀 24小时 以上，反复倾 泻去掉细颗粒， 或沸水浴中煮沸 2～3小时，可去 除颗粒内部的空 气及灭菌。;（二）连接层析装置 1. 先将层析柱垂直固定在铁架台上。 2. 按下图将各部位连接起来。;（三）装柱与层析 1.装柱 向层析柱中注入少量洗脱液（去离子水），将凝胶浆液沿玻棒缓慢倾入柱中（注满）。凝胶自然沉积约1～2cm 高度后打开下端出水口,待凝胶床面上升到约3/4柱高停止。关闭出水口,静置。;。 ;3.加样与洗脱 用刻度吸管吸取1ml样品（蛋白质－硫酸铵溶液），其尖头小心沿层