实验_酵母醇脱氢酶的提纯和性质的研究.docVIP

. .. .. . .下载可编辑. 实验三 酵母醇脱氢酶的提纯及其性质的研究 醇脱氢酶（ADH）是生物体内重要的氧化还原催化剂之一，在生物催化、生物医学领域都有较为广泛的应用。生物体内的很多醇类代谢都是通过醇脱氢酶催化完成的。醇脱氢酶来源广泛，种类繁多，可按肽链长度分为短链、中链、长链醇脱氢酶，所含肽链氨基酸残基数分别为250、375和600~750，酵母醇脱氢酶（YADH）是其中研究和应用最为广泛的一种。酵母醇脱氢酶以NAD+/NADH为辅酶，可逆催化醇和醛/酮之间的氧化还原反应。酵母醇脱氢酶为四聚体，单个亚基肽链含347个氨基酸残基，亚基相对分子质量为35 000。 （一）酵母醇脱氢酶的提纯 一、实验目的 1. 学习和掌握醇脱氢酶提纯的原理和方法； 2. 掌握醇脱氢酶活力的测定方法。 二、实验原理 以酵母为原料，利用热变性、有机溶剂沉淀蛋白质等方法，提取具有一定纯度的酵母醇脱氢酶。在提纯过程中，每经一步提纯处理，都需测定酶蛋白质含量和活力，并计算得比活力(本实验中比活力=活力单位数/mg蛋白质)。唯有比活力提高了，才证明所用提纯措施有效，酶制剂的纯度提高了。 醇脱氢酶的辅酶NAD（以NAD为辅酶的醇脱氢酶，它只作用于一级醇、二级醇和半缩醛脱氢酶，动物醇脱氢酶还能催化环一级醇脱氢，酵母醇脱氢酶无此活力。另有以NADP为