分子发光光谱法.pptxVIP

第五章 分子发光光谱法;某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发态回到基态，这种现象称为分子发光，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法。;根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光源来激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光—化学发光分析法 电致发光：以电能来激发而发光—原子发射光谱法 生物发光：以生物体释放的能量激发而发光 ;二、分子荧光分析法的特点;2. 选择性好 不同的物质用不同的光进行激发，选择不同的激发光波长 不同的物质发射的荧光不同，选择不同的检测荧光波长 比较容易排除其它物质的干扰，选择性好 3. 实验方法简单 4. 待测样品用量少；仪器价格适中；测定范围较广 具发光强度可定量测定许多痕量的无机物和有机物，广泛应用在生物化学、分子生物学、免疫学及农牧产品分析、卫生检疫等领域。 荧光法比磷光法应用广泛，不如分光光度法;§5.2 分子荧光和磷光的基本原理;激发三重态：分子吸收能量后，在跃迁过程中伴随着电子自旋方向的变化。用T1、T2分别表示分子第一和第二激发三重态。;1. 振动弛豫: 它是指在同一电子能级上，电子由高振动能级转移至低振动能级的无辐射跃迁过程。;;荧光发射：当分子处在单重态的最低振动能层时，去激发过程是以10-7～10-9s左右的时间内发射一个光子回到基态。;从图中看出 ?磷＞ ?荧＞ ?激 ? ? ?* 易产生荧光 n ? ?* 易产生磷光;二、激发光谱和发射光谱;三、分子荧光参数;2．荧光寿命;物质只有吸收了紫外可见光，产生? ? ?* n ? ?*跃迁，产生荧光 ? ? ?*与n ? ?*跃迁相比，摩尔吸收系数大，寿命短 ? ? ?*跃迁常产生较强的荧光， n ? ?*跃迁产生的荧光弱，但可产生系间窜跃，产生更强的磷光 一般情况，有机芳香族化合物及金属离子配合物是最强最有用的荧光体;具有共轭体系的芳环或杂环化合物， ?电子共轭程度越大，越易产生荧光; 环越多，共轭程度越大，产生荧光波长越长，发射的荧光强度越强; 芳香族化合物因具有共轭的不???和体系，多数能发生荧光 多环芳烃是重要的环境污染物，可用荧光法测定 3，4 - 苯并芘是强致癌物;2. 刚性平面结构——— 较稳定的平面结构;例 1，2 - 二苯乙烯;3. 金属螯合物的荧光;4. 取代基的类型;（2）减弱荧光的取代基 ——-COOH 、 -NO2 、-COOR 、 -NO、-SH 吸电子基团, 使荧光波长短移，荧光强度减弱 （3）影响不明显的取代基 —— -NH3+、-R、- SO3H等 (4) 芳环上被F、Cl、Br、I 取代后，使系间窜跃加强，磷光增强，荧光减弱。其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，磷光相应增强，这种效应为重原子效应。 (5) 取代基位置—— 对位、邻位取代增强荧光，间位取代抑制荧光。;四、环境对荧光、磷光的影响;3. pH的影响;但两个苯环相连的化合物，又表现出相反的性质，分子形式无荧光，离子化后显荧光;4. 荧光猝灭（荧光熄灭）; （ⅱ）能量转移 它是指处于激发单重态的荧光分子M*与熄灭剂相互作用后，发生能量转移，使熄灭剂得到激发，其反应如下;(ⅳ) 自熄灭和自吸收 当荧光物质浓度较大时，常会发生自熄灭现象，这可能由于激发态分子之间的碰撞引起能量损失。假如荧光物质的吸收光谱和发射光谱有较大的重叠，由荧光物质发射的荧光，有一部分可能会被它自身的基态分子所吸收，这种现象称为自吸收。随荧光物质浓度的增加，自吸收现象将会加剧。;五、荧光强度与荧光物质浓度的关系;当A﹤0.05时，方括号中其它各项与第一项相比可忽略不计，上式简化 If = 2.3 ?f I0A =2.3 ?f I0 ?bc;荧光强度与物质浓度呈线形关系，If=KC只有在浓度低时使用，荧光物质测定的是微量或痕量组分，灵敏度高。 浓度高时， If与C不呈线形关系，有时C增大， If反而降低因为公式[ ]中后面影响，有时发生荧光猝灭效应。;（一）荧光分析仪器——主要由光源、单色器、液槽、检测器和显示器组成;1、光源;2、单色器;3、样品池;（二）磷光分析仪器;（一）定量分析方法 定量分析依据 If = KC Ip = KC 1. 标准曲线法——最常用的定量分析方法 将已知量的标准物质与试样在相同条件下处理，配制一系列标准液，测定它们的相对发光强度。 以相对荧光强度为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标;2. 荧光猝灭法;与标准曲线法相似，对一定浓度的荧光体系，分别加入一系列不同量的猝灭剂 Q ，配成一个荧光物质—猝灭剂