微生物工程发酵菌种制备原理与技术.pptxVIP

2.1 发酵工业微生物菌种;2.1.2 发酵工业常用微生物种类 细菌 主要生产氨基酸、核酸、酶、多糖、有机酸等 常用菌种： Escherichia coli; Bacillus subtilis; Lactobacillus lactis; Corynebacterium glutamicum;放线菌 主要生产抗生素、某些特定的酶； 常用菌种： Streptomyces lividans; S. coelicolor; S. hygroscopicus; Micromonospora echinospora; Actinoplanes ferrugineus; ;酵母 主要生产酒精、有机酸、 单细胞蛋白 常用菌种： Saccaromyces cerevisiae Pichia pastoris Candida glabrata C. tropicals Phaffia rhodozyma Yarrowia lipolitica;霉菌 主要生产：抗生素、有机酸、酶、???素； Penicillium chrysogenum Aspergillus niger A. oryzae Rhizopus oryzae ;2.1.3 发酵工业微生物的基本要求;2.1.4菌种的制备原理和方法;从自然界筛选目标菌株的方法与步骤;微生物的分离;生化反应法；;组织分离法;合理的筛选策略是关键！;氨基酸产生菌的筛选 ;对产物进行菌种筛选时，有两条经验：;分离筛选工作在实际中应用的几个方面;2.1.5 适应性进化（菌株驯化）;2.1.6 菌种的保藏;菌种的退化和防止 菌种退化：菌株由于移接传代或保藏之后，群体中某些生理特征或形态特征逐渐减退或完全丧失的现象，主要表现为生长速度变慢和目标产物生产能力的下降；;防止退化的方法： 尽量减少传代； 经常进行纯化； 创造良好的培养条件； 单核细胞的移植传代； 采用有效的保藏方法；;菌种的复壮;工业微生物菌种的保藏 不死、不变、不乱； ;斜面保藏法 4℃； 非长期保存；1-3个月需传代，可传3-4代； ;液体石蜡油保藏法； 尤其适用于丝状担子菌； 一般存活期为5～7年，有的可以达到10年以上，但以2～3年转管 ;冷冻干燥保藏法； 5-10年，不适合丝状真菌； ;液氮超低温保藏法； -196℃； ;甘油低温保存： 15%甘油，-80℃；;2.2 微生物诱变育种;2.2.2 诱变育种基本步骤;② 出发菌株的纯化 ③单细胞悬液的制备； ④ 诱变剂及诱变剂量的选择 ⑤ 诱变处理方式 （单因子、复合因子） ⑥ 诱变菌株的筛选;高通量筛选技术：;2.3 微生物原生质体育种和基因组改组育种;2.3.2 微生物原生质体再生育种;原生质体的制备： 酶解法 预处理： 细菌（青霉素）；放线菌（甘氨酸）； 霉菌（脂肪酶）；酵母菌（EDTA或巯基乙醇） 置于稳定剂中； 酶的选择 ： 放线菌、细菌（溶菌酶） 霉菌 （蜗牛酶或纤维素酶） 酵母 （蜗牛酶或葡聚糖酶） ;原生质体再生（细胞壁） 双层平板上，半固体培养基中；;2.3.3 微生物原生质体诱变育种;2.3.4 微生物原生质体转化技术;2.3.5 微生物原生质体融合技术;出发菌株的选择（具有较大遗传差异的近亲菌株） 菌体的活化 原生质体的制备 原生质体融合 原生质体再生 菌株的分离 筛选 ;原生质体融合;2.3.6 基因组该组育种;2.4 微生物的基因工程育种;主要步骤： 目标DNA的获得 目的基因与载体的重组 将重组基因转入宿主细胞 重组子的筛选