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第三章 分子发光分析法;3.1.1荧光与磷光的产生过程;2.电子激发态的多重度;分子吸收辐射后;3.激发态→基态的能量传递途径;; 辐射能量传递 （发射光子） 非辐射能量传递 化学反应;非辐射能量传递过程;辐射能量传递过程;（1）荧光的激发光谱; 激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大，称为最大激发波长 ?ex;3.激发光谱与发射光谱的关系;镜像规则的解释;3.1.3 荧光的产生与分子结构的关系 relation between fluorescence and molecular structure;（1）、长?～?*共轭结构： ?* → ?的荧光效率高，系间跨越过程的速率常数小，有利于荧光的产生。大多数能产生荧光的物质都含有芳香环或杂环具有共轭的?～?* 跃迁。其共轭程度愈大，荧光效率也愈大，波长长移。; 刚性结构可降低分子振动，减少与溶剂的相互作用，故具有很强的荧光。如荧光素和酚酞有相似结构，荧光素有很强的荧光，酚酞却没有。分子的刚性和共平面性越大，?越大，荧光强度越强。; 有些物质本身不发荧光或荧光较弱，但和金属离子形成配合物后，如果刚性和共平面性增加，就可以发荧光或增强荧光。如8-羟基喹啉是弱荧光物质，与Mg2+、Al3+ 等金属离子形成的配合物的荧光增强，利用这一特点可以间接测定金属离子。 ;（3）取代基团对分子荧光的影响 给电子取代基：能增加分子的π电子共轭程度，使荧光效率提高。如—NH2、—OH、—OCH3、—CN、—NHR、—NR2等； 吸电子取代基：可减弱分子π电子共轭性，使荧光减弱甚至熄灭。而-COOH、—NO2、—C=O、—F、—Cl等 还有一类取代基则对荧光的影响不明显，如—R、—SO3H、—NH3 等。;;影响荧光强度的外部因素 1、温度 当温度升高时，介质粘度减小，分子运动加快，分子间碰撞几率增加，从而使分子无辐射跃迁增加，荧光效率降低。 ;增溶、增敏、增稳作用。 优点： （1）增加荧光物质的溶解度； （2）增加摩尔吸光系数； （3）增加荧光物质的稳定性。 例如：环糊精，十二烷基磺酸钠;4.pH值 ;（2）溶液pH值的改变会影响配合物的组成，从而影响它们的荧光性质。 Ga3++邻-二羟基偶氮苯pH3???41:1配合物（荧光） Ga3++邻-二羟基偶氮苯pH6～71?2的配合物（无荧光）。 ;5.内滤光作用和自吸现象;6.溶液荧光的猝灭;7.散射光; 选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰;3.1.5 常用荧光试剂 fluorescent reagent ; 能用荧光分析法测定的有机物包括多环胺类、萘酚类、嘌啉类、吲哚类、多环芳烃类、具有芳环或芳杂环结构的氨基酸类及蛋白质等；药物中的生物碱类如麦角碱、蛇根碱、麻黄碱、吗啡、喹啉类及异喹啉类生物碱等；甾体类如皮质激素及雌醇等；抗生素类如青霉素、四环素等；维生素类如维生素A、B1、B2、B6、B12、E、抗坏血酸、叶酸及烟酰胺等。此外，中草药中的许多有效成分，不少是属于芳香性结构的大分子杂环类，都能产生荧光，可用荧光分析法作初步鉴别及含量测定。荧光分析法的灵敏度高，选择性较好，取样量少，方法快速，已成为医药学、生物学、农业和工业等领域进行科学研究工作的重要手段之一。以下是几个重要的荧光试剂：;? ;2．邻苯二甲醛(OPA) 在2?巯基乙醇存在下，pH9～10的缓冲溶液中OPA能与伯胺类、特别是除半胱氨酸、脯氨酸及羟脯氨酸外的a?氨基酸生成灵敏的荧光产物。取OPA 500mg溶于10ml乙醇中，加200ml 2?巯基乙醇，将此混合液加至1L 3％的硼酸溶液中，再用KOH调节至pH10，即为常用试剂溶液。荧光条件为：λex=340nm，λem=455nm。;3．1?二甲氨基?5?氯化磺酰萘(Dansyl-Cl，丹酰氯) 能与伯胺、仲胺及酚基的生物碱类反应生成荧光性产物。取50mg或100mg试剂，溶解于500ml无水丙酮中即可使用。与丹酰氯类似的一个试剂是丹酰肼(Dansyl－NHNH2)，它能与可的松的羰基缩合，产生强烈荧光。荧光条件为：λex=365nm，λem=500nm左右。 丹酰氯试剂不稳定，其水解产物Dansyl?OH呈蓝色荧光，必须暗处保存，每周重新配制。; 无机离子一般不显荧光，与有机试剂形成有荧光的配合物后，可测量约60种元素及离子 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土——采用荧光分析法 氟、硫、铁、银、钴、镍——采用荧光熄灭法测定 铜、铁、钴、锇及过氧化氢——采用催化荧光法测定 铬、铌、铀、碲——采用低温荧光法测