功能基因序列分析郭燕.pptxVIP

汇报内容;一 背景介绍;二 已知功能基因的鉴定_以PQQ为例;PQQ 只能在某些革兰氏阴性菌中合成，具有生物学功能如下：;PQQ能够促进烟草种子萌发，提高脂肪酶活性和种子呼吸速率， 还能够通过促进生长素和细胞分裂素合成，促进分子水平基因调控，从而提高植物细胞新陈代谢而发挥促进植物生长的作用。 在冬小麦花退化高峰的孕穗期和生长代谢旺盛期，喷洒PQQ 可以提高叶片中叶绿素含量，加快植物的光合作用，提高谷丙转氨酶和硝酸还原酶的活性，从而调节植株体内生理代谢功能，有益于改善植株???养供给，减少穗部小花败育，提高麦穗结实率。 2008 年，Choi 等报道了一种植物根际促生长细菌 ( plant growth promoting rhizobacteria，PGPR) Pseudomonas fluorescens B16，该菌株为合成 PQQ的野生型菌株，协和培养该菌与植物可以增加西红柿花数量、植株高度、果实数量和果实总重量，而所有不能合成 PQQ 的突变型菌株则没有此作用效果。因此，推测 PQQ 是 PGPR 发挥作用的重要原因之一。;刺激人体细胞生长：Naito 等报道低浓度 PQQ ( 0.003～30 μM)显著增强人成纤维细胞 DNA 的合成，并且显著增加细胞密度，相比之下，PQQ 的刺激作用优于成纤维细胞生长因子和胰岛素等生长因子，与上皮细胞生长因子的作用相当； 但当PQQ浓度达到750～1500 μM 时，DNA 合成受到抑制引起细胞死亡。国内（熊顺华等）也先后报道了适量浓度的 PQQ对大鼠皮质神经元和海马区神经元的生长速度有促进作用，但 PQQ 的浓度过高会产生毒性。; Ⅱ PQQ 是动物生长、发育和繁殖必需的营养因子; Ⅲ PQQ 对自由基有清除作用，可以保护机体减少氧化损伤;防止眼晶状体损伤及肝脏脂质过氧化：白内障的发生与自由基水平升高有关。PQQ能够提高晶状体中 GSH 水平防止氧化应激对晶状体的损伤，保证晶状体代谢的正常进行，从而避免了因晶状体蛋白变性而发生的混浊，缓解白内障症状。同样的原理，PQQ 可以通过提高肝脏中GSH 水平，从而抑制肝脏内脂质过氧化发生，促进胆绿素通过胆小管向胆囊分泌，减少其在肝脏中的停留。 抑制化学发光及炎症产生：化学发光是突发性氧化作用，PQQ 通过抑制突发性氧化作用及诱发 ＲOS 的失活抑制化学发光的作用；PQQ 亦可抑制炎症的产生，将鼠爪中注射角叉藻胶，可引起温度升高及局部水肿等炎症反应。如果先在小鼠腹腔注射 PQQ，然后注射角叉藻胶，可明显发现局部水肿受到抑制，功效则与消炎痛 ( indomethacin) 相当 。;抗氧化，保护肝脏损伤：PQQ 对由某些肝细胞毒素造成的肝损伤具有保护作用，在大鼠实验中，如由硫代乙酰胺、四氯化碳、D－半乳糖胺等造成的肝损伤通过使用 PQQ可显著降低肝脏血清胆红素、谷丙转氨酶的水平但不影响肝脏的重量。 即使肝损伤已发生，PQQ 的作用仍十分明显，健康大鼠的血糖、血尿氮等血、尿常规生化指标亦不受影响。330 μM 的GSH 和21μM 的维生素 E 的作用与3 μM 浓度 PQQ 的对肝脏的保护效果相同。;PQQ 发挥抗氧化作用的其他功效：乙醛是乙醇代谢的有害中间产物，也是乙醇中毒的重要原因。PQQ 通过加快乙醛氧化的速度来降低乙醛的含量，进而降低小鼠乙醇中毒的危险。PQQ 在保护植物方面同样有功效，在冷胁迫条件下，可以利用 PQQ 减缓过氧化物歧化酶( SOD) 、抗坏血酸过氧化物酶 ( AsAPOD)活性，促使 GSH 含量的下降，从而一定程度上减轻低温胁迫对黄瓜幼苗的伤害。 ;Ⅳ 提供神经营养和保护作用;小结;报道已知微生物菌属如Pseudomonas、Erwinia等属的一些菌株具有合成PQQ的基因。 PQQ 、有机酸和解磷菌的解磷作用密切相关，P. fluorescens B16, the PQQ 操纵子由11个基因组成, pqqA, -B, -C, -D,-E, -F, -H, -I, -J, -K, and pqqM. ;分析方法——已知基因;3 比对蛋白序列——NCBI;4 下载模式菌株;Another——直接以核苷酸序列比对;5 比对建树——MEGA;;利用 SSCP 技术分析甘蓝型油菜 功能基因序列差异;SSCP 检测与分析;;差异片段与原序列的比较分析