he的染色基本原理.pptxVIP

一、细胞核的染色原理; 细胞核内的染色质主要成份，去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色，苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。结果：细胞核呈蓝色，软骨基质，钙盐颗粒呈深蓝，粘液呈灰蓝。;灰蓝色;二、细胞浆的染色原理; 细胞浆内主要成份是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与PH值有密切关系，当PH调到蛋白质等电点4.7~5.0时，胞浆对外不显电性，同时酸或碱性染粒不易染色，当PH调剂6~8时，大于蛋白质的等电点时，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，同时胞核也被染色，核和胞浆难以区分（阴离子）的染料染色。伊红是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阴离子）结合而使细胞浆染色。结果：细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，如：胞浆内嗜酸性颗粒呈仅先强的鲜红，胶原纤维呈桔粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈桔红色；与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。;质量好HE具备条件;1. 细胞核与细胞浆蓝红相映，鲜艳亮丽； 2. 胞核鲜明、核膜、核染色质颗粒均清晰可见； 3. 组织或一般结构特点及假物质成分均能显示出来。;三、HE染色中二甲苯、酒精和水洗的作用;1. 二甲苯的作用： 二甲苯可以溶解切片中的石蜡，以使染液可以进入细胞和组织，因此，石蜡的存在妨碍水和染料进入细胞，染色后二甲苯起透明切片的作用，以利于光线的透过。;2. 酒精的作用： 酒精用于苏木素前，由高→低是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯使水能进入细胞和组织中，伊红染色以后酒精由低→高逐渐脱去组织中水份，为二甲苯进入细胞创造条件，否则组织切片透明度达不到光学显微镜观察时透光度的要求，在显微镜下不可能清晰的细胞和组织结构。;3. 水洗的作用： 在脱蜡酒精之后用水洗切片，使切片进入水，才能使苏木精染液进入细胞核中，使细胞核染色。;水洗目的：①切片清洁，提高切片???量；②切片着色均匀；③防止不清洁的切片污染染液，保持染液的清洁和纯度。染色之后的水洗：为洗去未与切片结合染液分化以后的水洗：中止分化作用伊红染色后的水洗：洗去未结合的染液，以防止大量伊红进入染缸;四、分化和蓝化作用;1. 分化作用;2.蓝化作用;苏木素、伊红染色方法（自动染色机程序）;二甲苯 5分钟二甲苯 5分钟 二甲苯 3分钟无水乙醇 5分钟无水乙醇 3分钟无水乙醇 3分钟水洗 5分钟苏木素 13分钟水洗 3分钟;五、媒染染料; 有些染料直接对组织染色时，由于染料与组织间的作用力弱，有时甚至无作用，因此组织着色很浅，甚至不着色，我们必须将这些染料先与媒染剂结合生成色淀的染料称为媒染染料（此类染料多为天染染料，如苏木精、卡红）。;六、媒染剂; 凡由于和组织及染料结合，生成色淀，并促进染色的金属离子盐类或金属原子的含氧酸等称为媒染剂。 间接染色过程中，媒染染料+媒染剂结合=色淀+组织结合 媒染剂+组织然后 再与染料结合，生成组织——媒染剂——染料结合物，从而使组织着色;七、促染剂; 指只增强染料的染色能力，但不参与染色反应的一类物质。常见：伊红染液中冰醋酸。;八、染色过程中易出现的问题及原因;（一）染色过程中易出现问题及注意事项;1. 在进行染色操作前，进一步了解组织来源，固定、脱水、透明、包埋、切片的方法，因为这些处理因素对组织染色的效果都有直接影响，特别是固定液和固定时间与染色效果有特别重要的关系。;2. 染液的配制 时间：配制后染液不能久存再用 PH：如显示酸性粘液物质 配制方法及条件皆可直接影响染色效果 如配制Hannis明矾苏木素染液加入氧化汞 温度过高或温度过低，从而影响染色;3. 保持染色剂和各种用具的清洁4. 染色时间问题：与染液新旧、温度、不同固定液固定时间长短;（二）切片脱落;1. 由于组织处理不当所致;2. 切片方面原因;3. 染色过程中的原因;（三）染色不均;①组织取材固定不当，如：组织取材过大或过厚，所用固定液浓度不对时，不能将组织固定透或固定不完全；②切片厚薄不均或切片时出现横纹也能引起不均；③染色处理不当引起染色不均的原因;a. 组织脱蜡不彻底； 原因：试剂陈旧，温度低b. 染液试剂量少时；c. 分化剂浓度大，分化过强； 原因：进行急速分化或在分化后没有迅速入水，使之终止分化均可造成染色不均d. 染色或分