第八章植物体细胞杂交.ppt

二 影响原生质体融合的因素 1 原生质体的质量 必须要活力强的原生质体，活力弱在融合过程中导致原生质体死亡。 2 融合方法 首先应选择电融合，其次考虑PEG。 3 融合参数 PEG法一般考虑PEG的相对分子质量，纯度，浓度处理时间，原生质体的生理状态。电融合主要考虑原生质体密度，融合液的成分，电流强度，脉冲次数和宽幅。 三 融合产物的细胞学 在膜融合以后的数小时内，2个细胞的细胞质混在一起，形成一个双核异核体。 在双亲亲缘关系较近的异核体中，两个核有可能同步进行第一次有丝分裂，而且在这个过程中，二者的染色体被一个共同的纺锤体所牵引，在有丝分裂末期形成两个杂种子细胞。最终分化出体细胞杂种，其核内具有双亲的染色体组。 在双亲亲缘关系比较远的杂种细胞中，两个来源不同的染色体组常常不能完全结合在一起。 §3 杂种细胞的选择和体细胞杂种的鉴定 一 原生质体融合产物及杂种细胞发育 二 杂种细胞的选择系统 三 杂种细胞再生植株的鉴定 四 体细胞杂种的遗传特性 一 原生质体融合产物及杂种细胞发育 1 原生质体融合产物 原生质体融合是一个混合体，同核体，异核体，未融合的双亲原生质体。 同核体：细胞质融合，细胞核也融合，形成真正杂种细胞。 异核体：细胞质融合而细胞核未融合，两个细胞核共同存在一个细胞质中。 不对称杂种：异核体中两个细胞核，若亲缘关系较远，其中一个核中的染色体会被排除掉，形成不对称杂种。 细胞质杂种：细胞质依旧是杂合的，其中一个细胞核完全消失。 一 原生质体融合产物及杂种细胞发育 2 杂种细胞的发育动态 核质重组 细胞器重组 部分核物质或细胞器丢失 核分裂的非同步性 一 原生质体融合产物及杂种细胞发育 3 体细胞杂种的特点 形态上的趋中性 变异幅度大 非整倍性 双亲性状的共显性 偏亲现象 二 杂种细胞的选择系统 1 互补选择系统 根据两个具有不同生理或遗传特性的亲本，在形成杂种细胞时，能产生互补作用，根据这一特性只有发生互补作用的杂种细胞在特定的培养基上才能生长，而淘汰非杂种细胞。 （1）激素自养互补选择 两个亲本都需要外源生长素，融合后由于互补作用，能产生内源激素，可以在无外源激素的培养基中生长，采用无外源生长激素培养基可以筛选出杂种细胞。 二 杂种细胞的选择系统 （2）叶绿体缺失互补系统 利用叶绿体缺失突变体与野生互补来选择杂种细胞。突变体能生长，野生不能生长，杂种细胞能生长。 二 杂种细胞的选择系统 （3）营养缺陷型互补选择 利用营养缺陷型突变体，在有某种营养成分的培养基中不能生长，而杂种细胞起互补作用可以生长。如硝酸还原酶缺陷突变体不能在以硝酸盐作为唯一氮源的培养基中生长，而杂合可以生长。 CnX-, nia- 二 杂种细胞的选择系统 （4）抗性互补选择系统 利用两个抗性有差异的原生质体，每个亲本对药物敏感性分别被对方的抗性所掩盖。两个单抗亲体融合后会产生双抗的杂种细胞，利用选择培养基可以把杂种细胞选择出来。 二 杂种细胞的选择系统 （5）抗光性互补选择系统 利用两个突变体，由非等位隐性基因控制，正常光照生长缓慢，叶色淡绿，经过融合，具有两隐性基因的杂种细胞，经抗光互补，在光照下正常生长。对高光强具有抗性。 二 杂种细胞的选择系统 2 根据物理特性选择（可见标志） （1）根据可见标志选择 根据不同原生质体具有不同颜色，杂种细胞具有不同颜色，或细胞质状态不同。 如：非绿色原生质体与含有叶绿体的原生质体的融合。（半绿半白） 二 杂种细胞的选择系统 （2）根据荧光标记选择 将两种原生质体群体分别用不同的荧光染料标记，然后通过荧光显微镜鉴别异核体。 （3）应用荧光激活细胞分选仪自动分离杂种细胞。 二 杂种细胞的选择系统 3 组织培养筛选法 （1）根据愈伤组织生长差别选择 在曼陀罗和烟草种间体细胞杂交以及在小麦和某些其他禾谷类植物属间体细胞杂交中，发现杂种愈伤组织表现生长优势现象，因此融合处理后只要挑选生长快、长的最大的愈伤组织，就会从中分化出体细胞杂种 二 杂种细胞的选择系统 （2）植株再生能力的差别选择 不同来源的原生质体分化再生植株的能力不同。 在体细胞杂交中，只要有一个亲本的原生质体能够再生植株，融合产生的杂种细胞就能再生植株。 二 杂种细胞的选择系统 （3）根据生长和分化对培养基要求的差别选择 不同来源的原生质体对培养基成分和激素的要求不同。 设计的培养基只有杂种细胞能够生长。 三 杂种细胞的再生植株鉴定 1 形态学鉴定 体细胞杂交具有两个亲本的形态学性状，