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D-二聚体的检测 与应用 临漳县医院检验科 马玉海2012.11.1内容提要 一、D-二聚体的产生及技术现状 二、D-二聚体检测试剂的要求 三、标准化问题 四、Innovance D-Dimer 试剂 五、D-二聚体检测的临床应用 六、D-二聚体检测结果的解释D-Dimer检测技术的发展史1972年，Gaffney首先提出 D-Dimer检测，可作为监测凝血性疾病的“有用的工具”。1983年，Rylatt等首先报道了用单克隆抗体（DD-3B6/22） 检测D-Dimer（乳胶凝集法）。当时被誉为“金标准”。90年代 ，ELISA分析法、乳胶增强型免疫分析法等。 90年代末到本世纪初，免疫比浊法在凝血仪上实现了自动化检测。但D-二聚体片段异源性的问题被忽略了 一、D-二聚体的产生凝血系统纤溶系统纤溶酶原内源性凝血外源性凝血纤溶酶FDPX,Y,D,E等碎片X ′,Ｙ′,Ｄ,Ｅ等碎片DD,DXD,DD/E,YXD等复合物纤维蛋白原凝血酶原凝血酶纤维蛋白单体FXIIIFXIIIa交联纤维蛋白凝固纤溶所检测的D二聚体片段 D-二聚体检测的技术现状□制备单克隆抗体，针对的只是某类型D-二聚体。□病理过程中可产生多种类型D-二聚体，由于不同检 测试剂只测定其中某种类型，而非降解片段的全部， 因此各类试剂在对同一标本进行测定时，其敏感性 显著不同。□目前，30种检测方法（20余 种单克隆抗体）被应用于临 床，不同试剂间差异非常显著。□无统一的国际标准D-二聚体检验方法的演变□低敏方法导致许多病理状态无法及时反映。□《急性肺血栓栓塞症诊断治疗专家共识》中华内科杂 志2010年1月。□推荐…高敏感度的方法□国际上目前已经开始逐渐推动高敏方法。□原方法敏感度低：阳性率低□新方法敏感度高：阳性率高□临床：与既往的使用经验不符二、D-二聚体检测试剂选择●高度敏感性和NPV - (几乎) 无假阴性●有明确的阈值（cutoff值） 适用于24小时作常规分析 可用于门急诊标本分析 自动化检测 操作步骤简易 快速的报告时间 定量检测,有标准、质控物 经济检测试剂盒 目前市场上用于检测D-二聚体的试剂品种有很多种，大体上可分为两种情况：一种是以欧美产品为代表，主要用于DVT/PE排除筛查 特点：灵敏度高，检测范围相对较窄。另一种是以日本产品为代表，主要是用于DIC诊断 特点：灵敏度相对较低，检测范围较宽VTE(DVT/PE)exclusionD-DimerDIC三、标准化问题无统一的国际标准目前有超过30种检测方法和20多种单抗被使用。存在两种报告单位： D-dimer（DDU）和纤维蛋白原当量(FEU)抗体对D二聚体不同片段有不同的亲和力不同的试剂有不同的干扰情况美国临床实验室标准化协会（CLSI） H59-P推荐指南D二聚体试剂标准——中国国家标准（讨论稿）4.2 阴性预测值结合临床诊断的验前概率进行D-二聚体检测，其阴性预测值应不低于95%。4.3 测试范围涵盖制造商提供的用于排除诊断的临界值的1/2到4倍的临床标本测定值。4.4 线性D-二聚体试剂在测试范围内，线性相关系数应大于0.98。4.5 精密度 4.5.1 重复性 用正常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过15％，用高值异常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过10％。 ……4.7 报告方式 D-二聚体的报告单位通常包括纤维蛋白原等量单位（FEU）和D-二聚体单位（DDU）两种形式。FEU是将D-二聚体的量用降解前纤维蛋白原分子的量来表达，因此，用FEU表达的D-二聚体的量相当于用DDU表达的1.7倍。在D-二聚体报告方式中还包括ng/mL、ug/mL和mg/L等形式，通常应该直接采用制造商提供的单位，不建议进行形式和量纲的转换四、Innovance D-Dimer检测试剂已通过美国FDA验证（FDA510K） 明确可用于静脉栓塞性疾病的排除，其阈值为0.5mg/L FEU 已得到EHA，ICTH和日本病理学会接受2010年在中国成功注册 检测原理全自动乳胶增强免疫比浊度法新一代单克隆抗体8D3 检测系统Sysmex? CA-7000 systemSysmex? CA-1500 systemSysmex? CA-560 systemCS series检测试剂抗体试剂：REAGENT乳胶颗粒包被低压冻干，需蒸馏水复溶稀释液：DILUENT 液体，用于样本稀释、定标稀释有缓冲液作用添加剂：SUPPLEMENT 液体，用于封闭非特异性抗体缓冲液：BUFFER 液体，使信号增强含有聚合碳水化合物的缓冲液定标品与试剂批号匹配有不同系统的靶值冻干粉人血浆为基质，所含D二聚体浓度大约为?4.4?mg/L FEU定标曲线有效期6个月以上定标范围: 0.19