优良菌种的选育.pptxVIP

第七章 优良菌种的选育;理想的工业发酵菌种应符合以下要求：;菌种选育，就是利用微生物遗传变异的特性，采用各种手段，改变菌种的遗传性状，经筛选获得新的适合生产的菌株，以稳定提高抗生素生产或得到新的抗生素产品。 任何抗生素要不断提高生产水平，菌种选育是一重要手段，一些高产菌株在传代和保藏过程中，不可避免地会逐步发生退化，这也需要通过菌种选育来复壮菌种 菌种选育常用的方法有：菌种的自然选育、诱变育种、菌种的基因重组。 ;第一节 微生物的遗传和变异;微生物是研究现代遗传学和其它许多主要的生物学基本理论问题中最热衷的研究对象。 对微生物遗传规律的深入研究，不仅促进了现代分子生物学和生物工程学的发展，而且为育种工作提供了丰富的理论基础，促使育种工作从不自觉到自觉、从低效到高效、从随机到定向、从近缘杂交到远缘杂交的方向发展。;一、遗传与变异的概念;变异(variation):生物体在外因或内因的作用下，遗传物质的结构或数量发生改变。 变异的特点： a.在群体中以极低的几率出现（一般为10-6～10-10）； b.形状变化的幅度大； c. 变化后形成的新性状是稳定的，可遗传的。;饰变（modification）：指不涉及遗传物质结构改变而只发生在转录、转译水平上的表型变化。特点是： a.几乎整个群体中的每一个个体都发生同样的变化； b.性状变化的幅度小； c.因遗传物质不变，故饰变是不遗传的。引起饰变的因素消失后，表型即可恢复。 例如：粘质沙雷氏菌：在25℃下培养，产生深红色的灵杆菌素；在37℃下培养，不产生色素；如果重新将温度降到25℃，又恢复产色素的能力。 ;二、 遗传变异的物质基础; 2.基因的物质基础 孟德尔不仅发现基因是生物体遗传的基本单位，并认定基因是由生殖细胞来传递的。当细胞核中的染色体被发现以后，人们认识到基因的传递规律和细胞分裂时染色体的行为是一致的。 1910年摩尔根用果蝇进行的遗传学实验证实了基因在染色体上，进而把基因和染色体联系了起来。 1928年格里费斯的转化实验证明了染色体的化学成分脱氧核糖核酸(DNA)是遗传物质。 后来在病毒重建实验和噬菌体感染实验中又进一步证明绝大多数生物的遗传物质都是DNA，只有一小部分病毒(包括动物、植物病毒和噬菌体)没有DNA，它们的遗传物质是核糖核酸(RNA)。;; 生产中把变异细胞在群体中尚未占主导的现象称为退化现象. 把变异细胞在群体中已占主导地位的现象称为变异现象． 当群体中出现变异现象时，则要把群体中的大量变异细胞除掉，只留下少数优良细胞进行培育，这种操作叫做自然选育. ;菌种的复壮（rejuvenation）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种;菌种的复壮措施：①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。 ②通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus huringiensis的复壮） ； ③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）。④采用有效的菌种保藏方法。;纯化分离的方法 ; 纯种的标准有两条： 一是群体中存在的不同菌落类型数量限制在相对低的水平，例如限制在3～5种类型以下。 二是群体中起主导作用的菌型的比例数应占绝对优势，如达到90％以上，或更高的比例，如98％、99％以上。 菌种经群体分离后证明达到以上两条标准即可认为是获得了纯株。 ; 任何一种微生物群体中都有占主要比例的菌落类型。这一主要类型的生理生化性状，包括产量的高低，便大体上决定了该菌株的特性。 以“纯种”这一目标选育菌种，主要应该是提高微生物群体中主要菌型的百分比，选择主型菌落在90％以上的纯株。同时辅以产量指标的选择。 ; 单孢子分离法: 将菌种的分生孢子制成一定浓度的分散的单孢子悬浮液，分离在平板培养基上，挑选单菌落进行筛选。 在产量高于亲株的菌株中选择群体中主要菌落类型比例高于90％以上的高产量纯株再进行3～5代连续传代试验，选择传代后生产能力仍保持原来水平范围的菌株，便是高产纯种。; 2.