光学显微镜的七种观察方式.pptxVIP

光学显微镜的七种观察方式;五、显微镜的七种观察方式;明场BF（透射明场，反射明场）最常规的显微观察方法—标本的颜色、透射率。 优点： 应用广泛，操作简单； 视野亮度高、均匀， 较好的色彩还原、图像平坦， 价格相对较低， 物镜也可用于荧光观察（如绿色、红色荧光） 缺点： 成像对比度低（透明或未染色标本）、缺乏立体感、应用局限。 应用领域：常规镜检、病理、染色标本;原理： 丁道尔(Tyndall)现象，微粒对斜射光反射或衍射，增大了对人眼可见性。 特点： 可以观察在普通??场中看不见的微小标本（如细菌、微粒等），分辨率可达20nm ~ 4nm，超显微观测。 缺点： 只能观察到物体存在、外部轮廓、运动状态等； 物镜使用的局限，不方便调节； 对标本要求较高（灰尘、盖片、载片等）。 应用： 微小粒子、细菌形态观察、细菌记数，透明标本观察等。;原理：利用被检物体的光程（折射率 x 厚度）差进行镜检，即利用干涉现象，将相位差变为人眼可以分辨的振幅差。 ;特点： 鉴定活体细胞最实用、最经济的方法 缺点： 需要光强高； 切片不能太厚(5~10um)； 盖片、载片需符合标准； 需增加单色滤镜以提高相差效果； 操作较麻烦； 相差荧光物镜的荧光成像效果较明场荧光物镜差。 应用： 可对无色透明的标本进行观察，尤其适于培养的活细胞、组织观察，也适用于细菌、血液、水生无脊椎动物等。 ;原理：依据波动光学原理观察和精密测定标本细节,或透明物体改变光束的物理参数,以此判别物质结构的一种显微镜。 ;应用：矿物质、化学物品鉴别，鉴别纤维、染色体、淀粉粒、细胞中晶体植物病理检验，鉴别骨骼、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿瘤细胞、横纹肌和毛发等。 ;什么是微分干涉？ 微分干涉(Differential interference contrast,DIC) :50年代法国光学家诺曼尔斯基（Georges Nomarski）改良了沃拉斯顿棱镜（Wollaston prism），在沃拉斯顿棱镜基础上完善了DIC理论及显微镜中DIC的使用方法。;原理： 通过特制的棱镜将偏振光分解相互垂直，强度相等的光束，光束载极近的两点（小于显微镜的分辨率）上通过被检物体，从而在相位上略有差别，使图象呈现出立体三维感觉。 DIC组件： 检偏镜、 检偏镜、 2个DIC棱镜（1个位于聚光镜中，一个位于物镜转盘中） ;优点： 可以使被检物体产生三维立体感觉， 观察效果更直观， 无须特殊物镜， 与荧光观察配合更好可以调节背景和物体的颜色变化而达到理想的效果。 缺点： 需要光强高， 双折射性物质不能达到DIC镜检效果， 不能应用于塑料容器培养物的观察， 镜检灵敏度有方向性，调节较复杂。 ;应用：无色透明活体标本的细微结构，无色荧光标本，染色标本，显微操作等 ;2020/1/14;原理：斜射光照射到标本产生折射、衍射，光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影，从而使透明标本表面产生明暗差异，增加观察对比度。 ;优点： 强立体成像效果，无光晕， 塑料/玻璃培养器皿适用， 可检测双折射性物质， 聚光镜的工作距离大于DIC， 背景与标本的亮度变化可调节， 物镜可用于明场、暗场、荧光观测。 缺点： 调试、使用稍复杂，成本较高等。 应用： 显微操作，内部结构、外部形态观测等;什么是荧光？ 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度辐射光——冷光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。 显微镜荧光利用光源激发——光化荧光 ;2020/1/14;2020/1/14