pcr试剂盒的选用和质检.pptxVIP

临床PCR试剂盒的选用和质检卫生部临床检验中心 李金明PCR或RT-PCR试剂盒的组成核酸提取试剂核酸扩增或逆转录-核酸扩增试剂产物检测试剂（有些使用全自动分析仪的PCR方法因其核酸扩增和检测同时完成，故无专门的产物检测试剂）影响PCR试剂盒质量的因素内在因素: 原材料、核酸提取方法、方法学设计影响PCR试剂盒质量的因素： 扩增所需的原材料寡核苷酸引物和探针缓冲液和dNTP聚合酶、逆转录酶等 PCR反应混合物 和 或 和Mg2+Taq DNA 多 聚 酶Mn2+rTth DNA 多 聚 酶dCTPAmpErasedGTP 生 物 素 标 记 的 引 物dUTPdATP寡核苷酸引物和探针其对试剂盒质量的影响首先是纯度。纯度的判断可根据260/280吸光度比值来判断，如?2.0，则需重新纯化。另一种方法是将其在聚丙烯酰胺凝胶上电泳，如出现一条以上的带或迁移位置错误，则需重新纯化。是否有污染。结合特异性（浓度）dNTP和缓冲液dNTP（包括dATP 、dCTP、 dGTP和 dTTP或 dUTP）的浓度缓冲液：在储存和扩增循环中稳定、作为聚合酶活性所必须的Mg＋＋（或用于rTth的Mn＋＋）的浓度以及pH等逆转录酶、DNA聚合酶酶的浓度酶的活性核酸扩增方法PCRRT－PCR转录依赖的扩增（TMA）连接酶链反应（LCR）链替代扩增（SDA）等影响PCR试剂盒质量的因素： 核酸提