生物化学蛋白质之一2010.pptxVIP

目 录;1.了解蛋白质的分类，掌握蛋白质元素组成的特点。 2.掌握蛋白质的基本构件分子：氨基酸的结构特点，从各氨基酸的结构特点上理解氨基酸的分类。 3.掌握氨基酸的理化性质，重点掌握两性电离与等电点含义、茚三酮反应及其应用。 ;一、 蛋白质分类;5.防御蛋白: 如免疫球蛋白； 6.毒蛋白：如溶血蛋白；;（二）、根据分子形状分类;（三）、根据分子组成分类;二、蛋白质的水解;2. 碱水解;3. 蛋白酶水解;§2.2 蛋白质的分子组成-氨基酸; 蛋白质中N是特征元素，且含量恒定，为16%左右，即16克氮/100克蛋白质，故可以用凯氏定氮法测定样品中总氮含量和无机氮含量, 求出样品中蛋白质含量; 即：;二、蛋白质分子的基本组成单位-氨基酸;（二）氨基酸的构型： ;（三）氨基酸的结构与分类;1.按氨基酸分子中羧基与氨基的数目分： ;;碱性氨基酸;中性氨基酸;丝氨酸 （Ser,S）;2、按侧基R基的结构特点分： ;中性脂肪族氨基酸;;组氨酸 （His,H）;苯丙氨酸 （Phe,F）;3、按侧基R基与水的关系分： ;4、按氨基酸是否能在人体内合成分： ;注：二十种氨基酸的结构特点 支链氨基酸：缬氨酸、亮氨酸，异亮氨酸 含羟基的氨基酸：丝氨酸、苏氨酸 含硫的氨基酸：半胱氨酸（含巯基）、 甲硫氨酸（含硫甲基） 含苯环的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸;注：二十种氨基酸的结构特点 含胍基的氨基酸：精氨酸 含咪唑基的氨基酸：组氨酸 亚氨基酸：脯氨酸 含酰胺的氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺 含吲哚基的氨基酸：色氨酸 含ε-氨基的氨基酸：赖氨酸;（四）蛋白质中不常见的氨基酸 羟-脯氨酸 羟-赖氨酸 r-羧基谷氨酸 6-氮-甲基赖氨酸;（五）非蛋白氨基酸 鸟氨酸 胍氨酸 高半胱氨酸 高丝氨酸 β-丙氨酸 γ-氨基丁酸等 ;三.氨基酸的理化性质;（二）化学性质; 从上图可知：氨基酸在酸性环境中，主要以阳离子的形式存在，在碱性环境中，主要以阴离子的形式存在。在某一pH环境下，以两性离子（兼性离子）的形式存在。该pH称为该氨基酸的等电点。所以氨基酸的等电点可以定义为：氨基酸所带正负电荷相等时的溶液pH。; 氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被碱???定，应该具有两性电离的性质，现以甘氨酸为例来说明氨基酸两性电离的特点。;;; 在酸性条件下，丙氨酸以阳离子形式存在，可以看作是一个二元弱酸，有两个可以解离的H+，即COOH上的H+和NH3上的H+。 物质的解离常数是用滴定曲线的实验方法求得，画出曲线。 加入酸碱使丙氨酸的净电荷等于0时，丙氨酸所带的正负电荷相等，这时的pH值就是丙氨酸的等电点。 PI:两性电解质所带正负电荷相等时溶液的pH值。 PI=两性离子状态两侧的基团的PK’值之和的一半（2.34+5.69）/2=6.02;中性氨基酸： ;2.由α-氨基参加的反应： ;(2) 与甲醛的反应： 用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接滴定法。;(3) 与2,4-二硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应）：生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。 (4) 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）：生成苯乙内酰硫脲-氨基酸。 (5) 与丹磺酰氯（DNS-Cl）的反应：生成荧光物质DNS-氨基酸。;3.α-羧基参加的反应： (1)与碱反应成盐 (2)与醇反应成酯 (3)与酰化试剂反应成酰氯; 4.α-氨基与α-羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应：除脯氨酸与羟脯氨酸外，可与其它氨基酸生成蓝紫色化合物。脯氨酸与羟脯氨酸为黄色化合物。 ;(1)??Millon反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。 Millon试剂：汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。 产物：红色的化合物。 (2)??Folin反应：检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应。 Folin试剂：磷钼酸、磷钨酸混合溶液。 产物：蓝色的钼蓝、钨蓝。 (3)??坂口反应：检测Arg或含Arg的蛋白质的反应。 坂口试剂：α-萘酚的碱性次溴酸钠溶液。 产物：砖红色的沉淀。;(4)??Pauly反应：检测His、Tyr及含His、Tyr蛋白质的反应。 试剂：对氨基苯磺酸盐酸溶液、亚硝酸钠、碳酸钠混合溶液. 产物：橘红色的化合物。 (5) 乙醛酸的反应：检测Trp或含Trp蛋白质的反应。 当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中叠加时，产生分层现象，界面出现紫色环。 (6) Cys的反应：Cys或含Cys蛋白质与亚硝基亚铁氰酸钠在稀氨的溶液中，产生一